柴胡疏肝散加减对胆囊胆固醇结石肝郁气滞证小鼠SCF/C-kit信号通路的作用机制

作     者：王荷颖 谢玉春 王素英 闵莉 

作者机构：福建中医药大学中医证研究基地 福建省中医健康状态辨识重点实验室 

出 版 物：《中国中西医结合杂志》 (Chinese Journal of Integrated Traditional and Western Medicine)

年 卷 期：2024年

核心收录：

学科分类：1008[医学-中药学(可授医学、理学学位)] 1006[医学-中西医结合] 100602[医学-中西医结合临床] 10[医学] 

基　　金：福建省自然科学基金项目(No.2021J01928) 

主　　题：胆囊胆固醇结石 肝郁气滞证 干细胞因子/酪氨酸激酶受体信号通路 胆囊收缩 柴胡疏肝散 中药复方 中西医结合 

摘      要：目的 观察柴胡疏肝散加减通过干细胞因子/酪氨酸激酶受体（SCF/C-kit）信号通路对胆囊胆固醇结石（CS）肝郁气滞证小鼠胆囊收缩功能的改善作用，并探讨其作用机制。方法 将48只5周龄雄性ICR小鼠按照体重随机分为空白组12只，模型组36只，模型组小鼠予2%高脂致石饲料喂养16周，建立CS小鼠模型。将CS造模成功后小鼠33只分为CS组、CS肝郁组、柴胡疏肝散组，每组11只。除CS组外，其余2组采用“慢性不可预见性温和应激（CUMS）+孤养法建立CS肝郁气滞证小鼠模型，柴胡疏肝散组在造模同时柴胡疏肝散（0.02 mL/g）灌胃，其余组灌胃等量生理盐水，连续干预21天。观察肝郁气滞证造模期间小鼠一般情况，每隔3天记录体重变化；造模前后对各组小鼠进行旷场实验、强迫游泳及糖水偏好；比较小鼠精神、行为活动等。ELISA检测血清胆囊收缩素（CCK）、胆汁中总胆固醇（TC）、总胆汁酸（TBA）、磷脂（PL）含量并计算胆固醇饱和指数（CSI）水平；取各组小鼠胆囊组织进行苏木素-伊红（HE）染色；免疫荧光法检测胆囊Cajal间质细胞（ICC）细胞表达；实时荧光定量（RTq PCR）及蛋白免疫印迹法（Western Blot）分别检测小鼠胆囊组织中干细胞因子（SCF）、酪氨酸激酶受体（C-kit）、胆囊收缩素受体（CCK-A）、可激活磷酸酯酶C(PLC)mRNA水平及蛋白表达。结果 与空白组比较，模型组小鼠胆囊结石状况明显；CS组、CS肝郁组血清CCK，胆汁TBA、PL含量显著降低，胆汁TC、CSI(1)含量显著增加（P0.01）；小鼠胆囊壁增厚，皱襞缩短、分支减少病理改变，胆囊C-kit阳性蛋白表达减弱，ICC细胞数量显著减少，SCF、C-kit、CCK-A、PLC mRNA与蛋白表达均显著下调（P0.01）；与CS组比较，CS肝郁组抑郁表现明显，血清CCK，胆汁TBA、PL含量显著减少（P0.01），胆汁TC含量、CSI水平显著增加（P0.01），小鼠胆囊病理改变加重，胆囊C-kit阳性蛋白表达明显减弱，ICC细胞数量明显减少，SCF、C-kit、CCK-A、PLC mRNA及蛋白表达均显著下调（P0.01）；与CS肝郁组比较，柴胡疏肝散组小鼠结石状况与抑郁表现改善显著，血清CCK、胆汁TBA、PL含量显著增加（P0.01,P0.05），胆汁TC含量、CSI水平降低（P0.05,P0.01），小鼠胆囊病理改变明显改善，胆囊C-kit阳性蛋白表达明显增强，ICC细胞数量明显增多，SCF、PLC、C-kit、CCK-AmRNA和蛋白表达显著上调（P0.05,P0.01）。结论 柴胡疏肝散加减可通过调节SCF/C-kit信号通路相关因子的表达，促进胆囊收缩，减轻胆汁淤积程度，改善胆囊结石。