拟轮枝镰孢丙氨酸转氨酶FvALT的克隆与表达分析

作     者：郝楠 耿珊 赵雨薇 侯智涵 赵斌 刘颖超 HAO Nan;GENG Shan;ZHAO Yu-wei;HOU Zhi-han;ZHAO Bin;LIU Ying-chao

作者机构：河北农业大学植物保护学院保定071000 

出 版 物：《生物技术通报》 (Biotechnology Bulletin)

年 卷 期：2024年第40卷第12期

页      面：256-263页

核心收录：

学科分类：1002[医学-临床医学] 100214[医学-肿瘤学] 10[医学] 

基　　金：国家重点研发计划项目(2023YFD1400500) 河北省自然科学基金项目(C2021204093,C2021204137) 河北省高等学校科学技术研究重点项目(ZD2020319) 

主　　题：拟轮枝镰孢 丙氨酸转氨酶 生物信息学分析 原核表达 分子对接 

摘      要：【目的】拟轮枝镰孢是玉米穗腐病的主要病原菌,探究拟轮枝镰孢FvALT的生物学功能,为新型靶向杀菌剂开发提供理论依据。【方法】利用ProtParam、ProtScale、WoLF PSORT和Clustal X等在线工具对FvALT的生理生化特征及同源性进行分析;采用SOMPA和SWISS-MODEL获得其蛋白结构,并利用AutoDock分析FvALT与底物的结合能力;进而通过原核表达和亲和镍柱层析方法获得目的蛋白,通过荧光滴定技术验证FvALT与底物的结合能力。【结果】FvALT为亲水性蛋白并定位于胞浆中,其蛋白二级结构以α-螺旋和无规则卷曲为主,并在镰孢菌中高度保守,具有典型的PTZ00377 superfamily结构域;FvALT的最佳诱导条件为0.4 mol/L IPTG,16℃诱导16 h;FvALT与α-酮戊二酸具有较强的结合作用,结合位点为ARG^(310)、SER^(149)、SER^(298)、SER^(300)和ASP^(258)。【结论】拟轮枝镰孢FvALT具有典型的丙氨酸转氨酶特征,与底物α-酮戊二酸特异结合。