鲤疱疹病毒2型和3型双重TaqMan荧光定量PCR检测方法的建立与应用

作     者：陈永聪 方勤美 柯翎 施少华 

作者机构：福建省农业科学院生物技术研究所 

出 版 物：《海洋渔业》 (Marine Fisheries)

年 卷 期：2025年

核心收录：

学科分类：0906[农学-兽医学] 09[农学] 

基　　金：福建省科技计划公益类专项(2020R10270010、2021R1027008) 

主　　题：鲤疱疹病毒2型 鲤疱疹病毒3型 双重TaqMan qPCR 

摘      要：鲤疱疹病毒2型（Cyprinid herpesvirus 2，CyHV-2）和3型（Cyprinid herpesvirus 3，CyHV-3）是鲤鲫鱼类及其杂交种的主要致病原，该病毒传染性强、致病率高，对水产养殖业危害严重。为快速、高效鉴别鲤疱疹病毒2型（Cyprinid herpesvirus 2，CyHV-2）和3型（Cyprinid herpesvirus 3，CyHV-3），本研究针对鲤疱疹病毒基因组的保守序列，设计了2对特异性引物，通过优化反应条件，建立了检测CyHV-2和CyHV-3的双重TaqMan qPCR方法，，并对该方法特异性、灵敏性和重复性进行评价。同时利用该方法对实验室保存的金鱼（Carassius auratus var）和锦鲤（Cryprinus carpiod haematopterus）临床样品进行检测。结果显示，该方法能特异性检测CyHV-2和CyHV-3，而对水产其他常见DNA或RNA病毒均无交叉反应；敏感性试验表明，该方法的最低检测量均为1×101copies. μL-1，表明该方法具有较高的灵敏性；组内和组间重复变异系数均小于3%，重复性良好。使用该方法对实验室保存的37份金鱼和78份锦鲤临床样品进行检测，病毒检出结果与运用国家标准（GB/T 36194-2018）和行业标准（SC/T 7212.1-2011）方法检测的结果一致。对5份CyHV-2（金鱼样品）和5份CyHV-3（锦鲤样品）阳性的临床样品进行混合后检测，结果均为CyHV-2和CyHV-3双阳性。研究表明，本研究建立的双重Taqman qPCR检测方法具有特异性强、灵敏性高和重复性好的优点，可用于临床上CyHV-2和CyHV-3的快速定量检测和鉴别诊断。