稳定表达鸡源PTEN蛋白DF1细胞系的构建及鉴定

作     者：王菁 李思雨 谭磊 孙英杰 仇旭升 廖瑛 丁铲 宋翠萍 

作者机构：广西大学动物科学技术学院 中国农业科学院上海兽医研究所 上海交通大学农业与生物学院 

出 版 物：《中国动物传染病学报》 (Chinese Journal of Animal Infectious Diseases)

年 卷 期：2024年

学科分类：0710[理学-生物学] 07[理学] 08[工学] 09[农学] 071007[理学-遗传学] 0901[农学-作物学] 0836[工学-生物工程] 090102[农学-作物遗传育种] 

基　　金：国家自然科学基金面上项目(32272977) 上海市兽医生物技术国家重点实验室开放课题(BD1500010) 

主　　题：PTEN MDV 稳转细胞系 细胞周期 

摘      要：PTEN（10号染色体上缺失的磷酸酶和张力蛋白同源物）是一种具有特异磷酸酶活性的抑癌基因，可控制多种细胞过程，其功能异常与肿瘤发生发展密切相关，包括细胞增殖、迁移和入侵、维持基因组稳定性、代谢等。为探究鸡源PTEN在鸡马立克氏病毒（MDV）致瘤机制中的作用，本研究通过构建带有Flag标签的过表达鸡源PTEN的慢病毒质粒，利用三质粒系统转染HEK-293T包装慢病毒，感染DF1细胞，通过嘌呤霉素筛选，获得PTEN蛋白的DF-1稳转细胞系(PTEN+/+)，蛋白免疫印迹（western blot，WB）验证了PTEN蛋白表达，细胞流式试验和CCK8细胞活力试验结果证实稳定表达PTEN可以减缓DF1细胞周期进程，从而抑制细胞增殖。此外，研究发现MDV 强毒株Md5在该细胞系中病毒复制受到抑制。上述结果表明鸡源PTEN基因成功整合入DF1细胞基因组并能稳定表达，为后续研究PTEN在MDV致瘤机制中的作用提供了重要工具。