基于“微生物群-肠-脑轴”探讨复方抗焦虑胶囊对慢性束缚应激大鼠的抗焦虑作用及机制

作     者：范文昕 姜婷月 王宇 张鸽 芦艺凡 刘朦朦 李佳园 马仁芝 石晋丽 FAN Wenxin;JIANG Tingyue;WANG Yu;ZHANG Ge;LU Yifan;LIU Mengmeng;LI Jiayuan;MA Renzhi;SHI Jinli

作者机构：北京中医药大学中药学院北京102488 

出 版 物：《中国实验方剂学杂志》 (Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae)

年 卷 期：2025年第31卷第4期

页      面：95-107页

核心收录：

学科分类：1008[医学-中药学(可授医学、理学学位)] 100504[医学-方剂学] 100506[医学-中医内科学] 1006[医学-中西医结合] 1005[医学-中医学] 100602[医学-中西医结合临床] 10[医学] 

基　　金：国家自然科学基金面上项目(82073971) 

主　　题：复方抗焦虑胶囊 焦虑症 慢性束缚应激模型 肠道菌群 肠道屏障 炎症 

摘      要：目的:观察复方抗焦虑胶囊对慢性束缚应激(CRS)模型大鼠焦虑样行为的干预作用,探究复方抗焦虑胶囊通过“微生物群-肠-脑轴发挥抗焦虑的作用机制。方法:采用CRS建立大鼠焦虑模型,将大鼠分为正常组、模型组、阳性药组(地西泮,1 mg·kg^(-1))及复方抗焦虑胶囊低、中、高剂量组(0.75、1.5、3 g·kg^(-1))。给药14 d后进行高架十字迷宫实验(EPM)、旷场实验(OFT)、明暗箱实验(LDB)和埋珠实验(MBT)。采用苏木素-伊红(HE)染色观察大鼠海马及结肠病理变化,尼氏(Nissl)染色观察海马神经元损伤情况;16S rRNA测序技术检测各组大鼠肠道菌群多样性变化;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测大鼠结肠中功能蛋白闭锁小带蛋白-1(ZO-1)及闭合蛋白(Occludin)mRNA的表达;酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测大鼠结肠、血清及海马体中炎症因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)、IL-1β的含量;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测大鼠结肠组织ZO-1、Occludin、核转录因子-κB p65(NF-κB p65)及大鼠海马组织NF-κB p65和脑源性神经营养因子(BDNF)蛋白表达。结果:与正常组比较,模型组大鼠进入高架十字迷宫时间及次数比例,进入旷场中央区域的时间及次数,进入明箱时间及穿越明暗箱次数及未被掩埋珠子的个数明显降低(P0.05,P0.01);与模型组比较,复方抗焦虑胶囊给药组能在不同程度上改善CRS模型大鼠的焦虑状态,其中高剂量组效果最优,能明显增加大鼠在高架十字迷宫中进入开臂的时间及次数比例(P0.05),提升大鼠在旷场中进入中央区域的次数(P0.05),显著增加其进入明箱时间、穿越明暗箱次数和未被掩埋珠子的个数(P0.01),并能缓解大鼠海马神经元及结肠病理损伤。16S rRNA结果表明,模型组厚壁菌门、Deferribacterota、罗姆布茨菌属(Romboutsia)、Phascolarctobacterium占比升高,拟杆菌门(Bavcteroidota)、乳杆菌属(Lactobacillus)相对丰度降低;给药组肠道菌群中Bavcteroidota、拟杆菌属(Bacteroides)、norank f norank o Clostridia UCG-014、及布劳特氏菌属(Blautia)相对丰度增加,厚壁菌门、Deferribacterota相对丰度降低。Real-time PCR、ELISA及Western blot实验结果表明,与正常组比较,模型组结肠ZO-1、Occludin及其mRNA表达水平显著降低(P0.01);结肠、血清及海马体中TNF-α、IL-6、IL-β含量显著升高(P0.01),结肠及海马NF-κB p65蛋白表达显著上升(P0.01),海马BDNF水平明显降低(P0.05)。与模型组比较,复方抗焦虑胶囊高剂量组可显著增加结肠ZO-1、Occludin mRNA(P0.01)的表达;降低CRS致焦虑大鼠结肠、血清及海马体中TNF-α、IL-6、IL-β含量(P0.01);增加结肠组织中ZO-1(P0.01),Occludin蛋白表达(P0.05),降低结肠及海马组织NF-κB p65蛋白表达(P0.05),并增加海马BDNF蛋白表达。结论:复方抗焦虑胶囊能明显改善CRS大鼠的焦虑样行为,其作用机制可能与调节肠道菌群紊乱、上调结肠紧密连接蛋白表达、修复肠黏膜机械屏障、下调NF-κB/BDNF信号通路,从而降低外周及中枢炎症反应有关。该研究证明复方抗焦虑胶囊通过“微生物-肠-脑轴发挥抗焦虑作用的理论,可为其进一步的研究提供新思路。