新德里番茄曲叶病毒实时荧光PCR检测方法的建立及应用

作     者：田沂民 于子翔 李友军 王溪桥 俞禄珍 龚静如 罗金燕 沈建国 于翠 Tian Yimin;Yu Zixiang;Li Youjun;Wang Xiqiao;Yu Luzhen;Gong Jingru;Luo Jinyan;Shen Jianguo;Yu Cui

作者机构：上海海关动植物与食品检验检疫技术中心上海200135 兰州海关技术中心 上海农业技术推广服务中心 福州海关技术中心 

出 版 物：《植物检疫》 (Plant Quarantine)

年 卷 期：2025年第39卷第1期

页      面：19-25页

学科分类：09[农学] 0904[农学-植物保护] 

基　　金：海关总署科研项目(2023HK016) 

主　　题：新德里番茄曲叶病毒 qPCR检测 特异性 灵敏度 定量检测 

摘      要：新德里番茄曲叶病毒(tomato leaf curl New Delhi virus,ToLCNDV)近两三年在很多国家开始发生扩散蔓延,是国内外高度关注的新发病毒。通过比对分析该病毒基因序列的特点,设计qPCR特异性检测引物探针ToLCNDV-173F/R/P,与引自参考文献的引物探针ToLCNDV-ToLAF/R/P、 ToLCNDV-B-F/R/P进行扩增效果的比对分析,证明了该引物探针对10种不同的阳性材料均有较好的检测效果。通过对不同病毒的阴性样品的检测试验,该方法具有较好的特异性。灵敏度分析试验显示最低可检测1.16 fg/μL病毒DNA样品,具有较高的灵敏度。建立ToLCNDV-173F/R/P qPCR定量检测的标准曲线,Ct值与模板总DNA浓度的对数值之间均呈良好的线性关系。对10种不同样品进行定量检测,植物叶片中ToLCNDV的DNA相对含量约9.93×10^(4)fg/μL~2.22×10^(6)fg/μL,植物种子中ToLCNDV的DNA相对含量约50.73 fg/μL~1 118.82 fg/μL。该方法克服了ToLCNDV序列变异性大、序列短小导致的引物设计困难问题,与EPPO推荐检测方法相比具有更强的灵敏度与兼容性,可以扩增该病毒的不同分离物,有效避免检测结果假阴性的出现。