靶向沉默DNMT3A对小鼠肺成纤维细胞胶原沉积、增殖及迁移活性的影响

作     者：汪先晨 尤峻柏 凌辉 范家好 陈齐 陶辉 沙纪名 Wang Xianchen;You Junbo;Ling Hui;Fan Jiahao;Chen Qi;Tao Hui;Sha Jiming

作者机构：安徽医科大学第二附属医院胸外科合肥230601 安徽医科大学第二附属医院麻醉与围手术期医学科合肥230601 

出 版 物：《安徽医科大学学报》 (Acta Universitatis Medicinalis Anhui)

年 卷 期：2025年第60卷第1期

页      面：66-72页

学科分类：1002[医学-临床医学] 1001[医学-基础医学(可授医学、理学学位)] 100101[医学-人体解剖与组织胚胎学] 100201[医学-内科学(含：心血管病、血液病、呼吸系病、消化系病、内分泌与代谢病、肾病、风湿病、传染病)] 10[医学] 

基　　金：安徽省高校自然科学研究项目(编号:2023AH040376) 

主　　题：DNMT3A DNA甲基化 肺成纤维细胞 增殖 迁移 肺纤维化 

摘      要：目的探讨靶向沉默DNA甲基化转移酶3A(DNMT3A)对小鼠肺成纤维细胞(PFs)胶原沉积、增殖与迁移活性的作用。方法为保证原代成纤维细胞的增殖迁移活性取新生C57乳鼠肺组织,剪碎后提取PFs,在显微镜下观察并鉴定形态。细胞贴壁后使用5 ng/ml TGF-β_(1)作用24 h诱导PFs细胞活化,并用小干扰RNA构建DNMT3A沉默模型;实验分为Control组、TGF-β_(1)组、TGF-β_(1)+siRNA-NC组和TGF-β_(1)+siRNA-DNMT3A组。应用Western blot方法检测DNMT3A、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和Ⅰ型胶原(CollagenⅠ)的蛋白表达变化;应用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(RT-qPCR)方法检测DNMT3A、α-SMA、CollagenⅠ的mRNA表达变化;CCK-8与EdU染色检测PFs增殖能力;划痕实验与Transwell迁移实验检测PFs迁移能力。结果与Control组相比,TGF-β_(1)诱导活化的PFs细胞组中DNMT3A升高(P0.01),纤维化与增殖相关指标α-SMA、CollagenⅠ的蛋白及mRNA水平也升高(均P0.05),同时PFs的增殖与迁移能力升高(均P0.0001)。而与siRNA-NC组相比,在DNMT3A沉默组中通过Western blot法检测DNMT3A(P0.0001)及相关指标α-SMA(P0.01)、CollagenⅠ(P0.01)的蛋白表达水平均降低,同时通过RT-qPCR法检测DNMT3A、α-SMA及CollagenⅠ的mRNA水平也均降低(P0.001),并且PFs细胞的增殖(P0.01)和迁移能力(P0.05)较对照组下降。结论沉默DNMT3A能够抑制胶原的沉积及PFs的增殖,DNMT3A可以促进PFs的增殖和迁移能力,进而促进PFs的活化以及肺纤维化的发展,这一过程可能受到DNA甲基化修饰的调控。