小鼠肺组织单细胞悬液制备的酶消化法比较研究

作     者：董心怡 谢楠希 徐玉东 王宇 杨永清 陈艳焦 DONG Xinyi;XIE Nanxi;XU Yudong;WANG Yu;YANG Yongqing;CHEN Yanjiao

作者机构：上海中医药大学岳阳中西医结合医院上海市针灸经络研究所上海200030 

出 版 物：《中国细胞生物学学报》 (Chinese Journal of Cell Biology)

年 卷 期：2025年第47卷第1期

页      面：91-100页

学科分类：1002[医学-临床医学] 100214[医学-肿瘤学] 10[医学] 

基　　金：国家自然科学基金(批准号:82105013、82374583) 上海市自然科学基金(批准号:23ZR1459900) 扬帆计划(批准号:20YF1445300) 上海市中医药三年行动计划[批准号:ZY(2021-2023)-0208]资助的课题 

主　　题：小鼠 肺组织单细胞悬液 单细胞测序 酶消化法 

摘      要：该研究比较两种胶原酶及配合使用Percoll细胞分离液对小鼠肺组织单细胞悬液中淋巴细胞得率、活性和数量的影响,为单细胞测序前处理提供技术参考。将12只C57BL/6小鼠随机分为四组,分别是Ⅰ型胶原酶消化组(G1)、Ⅰ型胶原酶消化+Percoll细胞分离组(G2)、Ⅳ型胶原酶消化组(G3)和Ⅳ型胶原酶消化+Percoll细胞分离组(G4)。四组方法所提取的肺组织单细胞悬液,于显微镜下进行形态学观察,拍照并计数,后采用流式细胞术检测单个核细胞、活细胞和淋巴细胞的得率和数量,以及不同免疫细胞亚群的比例和数量。结果显示,两种胶原酶对小鼠肺组织细胞解离效果无明显差异,G1组制备的肺单细胞数量显著高于G3组(P0.05)。相同数量的细胞中,G2和G4组获得单个核细胞、活性细胞、CD45^(+)细胞、CD3^(+)T细胞、CD8^(+)T细胞、NK细胞个数均显著高于G1和G3组(P0.05),但在CD4^(+)T细胞、CD11c^(+)细胞、NKT细胞个数上没有显著优势。应用Ⅰ型胶原酶消化可以获得更多的细胞总数,但应用Ⅳ型胶原酶消化可以获得更多的淋巴细胞。经过Percoll细胞分离液处理的G2和G4组可以分离获得更高活性的单个核细胞、CD45^(+)细胞、CD3^(+)T细胞、CD8^(+)T细胞和NK细胞,该研究为今后进行肺组织单细胞测序前处理提供了重要的技术参考。