羊源产气荚膜梭菌LAMP检测方法的建立

作     者：樊月圆 王瑾艺 刘亚波 茶金龙 白卫兵 四朗玉珍 富国文 FAN Yueyuan;WANG Jinyi;LIU Yabo;CHA Jinlong;BAI Weibing;SILANG Yuzhen;FU Guowen

作者机构：云南农业大学动物医学院云南昆明650000 云南农业职业技术学院云南昆明650031 西藏自治区农牧科学院畜牧兽医研究所西藏拉萨850000 

出 版 物：《中国兽医科学》 (Chinese Veterinary Science)

年 卷 期：2025年第55卷第1期

页      面：48-55页

学科分类：090601[农学-基础兽医学] 09[农学] 0906[农学-兽医学] 

基　　金：西藏自治区十四五重大专项(XZ202101ZD0001N) 

主　　题：产气荚膜梭菌 环介导等温扩增技术 可视化检测 

摘      要：本研究旨在基于环介导等温扩增(LAMP)技术建立一种快速诊断羊源产气荚膜梭菌的可视化快速检测方法。首先以产气荚膜梭菌cpa基因为靶基因,构建重组质粒;建立LAMP检测技术并对各反应条件进行优化,随后开展敏感性、特异性、重复性试验,扩增产物可视化及临床样品检测。结果显示,本研究成功建立了羊源产气荚膜梭菌的LAMP检测方法,筛选出最适温度、Mg^(2+)浓度、Bst DNA聚合酶和dNTPs添加量以及内外引物最佳浓度比。并通过浊度法或添加HNB、SYBR GreenⅠ、钙黄绿素染料显色,实现可视化。使用该方法对6种常见肠道菌进行检测,仅对产气荚膜梭菌具有良好的特异性;以DNA为模板时,其灵敏度与荧光定量PCR法相近,是普通PCR的100倍;以菌液为模板时,其灵敏度比普通PCR法高出1~2个数量级,兼具便捷快速的特点。结果表明,本研究成功建立了羊源产气荚膜梭菌LAMP法,该方法可用于临床样品的快速检测。