鹅星状病毒Ⅰ型与Ⅱ型双重荧光定量PCR检测方法的建立与应用

作     者：姚展杏 王超 林寅盛 赵丹 张嘉家 伍辉吉 朱婉君 张济培 陈济铛 YAO Zhanxing;WANG Chao;LIN Yinsheng;ZHAO Dan;ZHANG Jiajia;WU Huiji;ZHU Wanjun;ZHANG Jipei;CHEN Jidang

作者机构：佛山科学技术学院生命科学与工程学院广东佛山528225 佛山天牧生物科技有限公司广东佛山528225 

出 版 物：《中国家禽》 (China Poultry)

年 卷 期：2025年第47卷第1期

页      面：64-70页

学科分类：090603[农学-临床兽医学] 09[农学] 0906[农学-兽医学] 

基　　金：广东省普通高校科研项目重点领域专项(2020ZDZX1018) 佛山天牧生物科技有限公司技术开发项目(KH22275) 佛山万牧洲生物科技有限公司技术开发项目(KH23279) 

主　　题：鹅星状病毒 GAstV-1 GAstV-2 双重荧光定量PCR 雏鹅 痛风 

摘      要：为建立一种快速检测鹅星状病毒(Goose astrovirus,GAstV)Ⅰ型(GAstV-1)与Ⅱ型(GAstV-2)的SYBR GreenⅠ双重实时荧光定量PCR检测方法,试验根据GAstV-1的ORF1a特异保守序列与GAstV-2的ORF2特异保守序列分别设计1对引物,将PCR扩增的两个片段分别克隆至pMD18-T载体,构建重组质粒作为阳性质粒标准品,建立检测并鉴别GAstV-1与GAstV-2的SYBR GreenⅠ双重实时荧光定量PCR方法,并对该方法的特异性、灵敏性、重复性进行评估,并运用该方法对28份疑似痛风雏鹅临床样品进行检测。结果显示:建立的SYBR GreenⅠ双重实时荧光定量PCR方法检测GAstV-1、GAstV-2的标准曲线相关系数均在0.99以上,批间、批内重复变异系数均小于0.7%,最低检测限度均为10 copies/μL;该方法对鸭肝炎病毒、禽流感病毒、鹅细小病毒均无特异性扩增,同时检测GAstV-1与GAstV-2未出现交叉反应;该方法检测28份临床样品的GAstV阳性率为92.8%,其中GAstV-1和GAstV-2均为阳性的有6份,仅GAstV-2阳性的有18份,仅GAstV-1阳性的有2份。研究表明,建立的荧光定量PCR检测方法可用于GAstV-1与GAstV-2的鉴别检测,并且当前引发GAstV感染的主要病原依然是GAstV-2,GAstV-1和GAstV-2混合感染情况也同时存在。