利用CRISPR-Cas9 技术探究肠道ERβ对肠源性TPH1 和5-HT 水平的影响

作     者：呼文强 杨千嬉 贺桂琼 骆世芳 Hu Wenqiang;Yang Qianxi;He Guiqiong;Luo Shifang

作者机构：重庆医科大学神经科学研究中心重庆400016 重庆医科大学基础医学院人体解剖学教研室重庆400016 

出 版 物：《重庆医科大学学报》 (Journal of Chongqing Medical University)

年 卷 期：2025年第50卷第1期

页      面：37-43页

学科分类：1001[医学-基础医学(可授医学、理学学位)] 100104[医学-病理学与病理生理学] 10[医学] 

基　　金：国家自然科学基金资助项目(编号:82371203) 重庆市基础与前沿研究计划资助项目(编号:CSTB2023NSCQMSX0161) 

主　　题：雌激素受体β 色氨酸羟化酶-1 5-羟色胺 肠道 

摘      要：目的:探索C57BL/6J小鼠结肠上皮雌激素受体β(estrogen receptorβ,ERβ)缺失对结肠色氨酸羟化酶-1(TPH1,tryptophan hydroxylase-1)和5-羟色胺(5-hydroxytryptamine,5-HT)水平的影响。方法:利用CRISPR-Cas9技术获得Pvillin-Cre^(+/-)小鼠、ERβflox^(+/-)小鼠,通过配种繁殖最终获得肠道ERβ敲除纯合子组(ERβflox-/--Pvillin-Cre^(+/+),ERβCKO,n=5)、杂合子组(ERβflox^(+/-)-Pvillin-Cre^(+/+),ERβCKO^(+/-))(n=5)及同窝野生型(wild type,WT)小鼠。取6个月龄和12个月龄的各品系小鼠作为研究对象。结合苏木素-伊红染色(hematoxylin-eosin staining,HE)、酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)、免疫印迹(Western blot,WB)和免疫组化(immunohistochemistry,IHC)方法对各组小鼠肠道形态、肠道ERβ、5-HT和TPH1水平进行检测。结果:基因鉴定验证肠道ERβCKO小鼠成功构建后,WB显示肠道ERβ水平明显下调(P0.05)。HE显示肠道ERβ敲除后,肠道结构完整性与肠道黏膜上皮的绒毛发育均异常。ELISA结果显示,2个月龄段ERβCKO小鼠肠道5-HT水平较WT组小鼠下降明显(P0.05),且呈月龄依赖方式。IHC结果显示,各组小鼠肠道均出现TPH1免疫阳性表达,与WT小鼠相比,ERβCKO小鼠肠道TPH1免疫阳性细胞数量减少(P0.05),免疫阳性物表达量更低(P0.05),但TPH1未呈现月龄依赖方式。结论:结肠ERβ下调可引起结肠TPH1蛋白和5-HT水平含量降低,继而引发小鼠肠道功能异常,增加患肠道疾病的风险,这为以ERβ为靶点的肠道相关疾病的发病机制提供了实验室依据。