中药复方益糖康通过调控m6A甲基化修饰促进细胞自噬治疗糖尿病肾脏疾病

作     者：李可盈 于嘉祥 张瀚文 石岩 吴怡 王一霖 程玥凤 张文顺 

作者机构：辽宁中医药大学 辽宁省中医药研究院/辽宁中医药大学附属第二医院 

出 版 物：《中国实验方剂学杂志》 (Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae)

年 卷 期：2025年

核心收录：

学科分类：1008[医学-中药学(可授医学、理学学位)] 1006[医学-中西医结合] 100602[医学-中西医结合临床] 10[医学] 

基　　金：2023年辽宁省应用基础研究计划项目(2023JH2/101300094) 辽宁省科技厅联合基金项目(2023-MSLH-184) 辽宁省科技厅博士科研启动项目(2023-BS-141) “中医脏象理论及应用”教育部重点实验室开放基金(zyzx2402) 

主　　题：益糖康 N6-甲基腺嘌呤(m A) 自噬 分子伴侣介导的自噬(CMA) 糖尿病肾脏疾病(DKD) 

摘      要：目的：观察中药复方益糖康（YTK）通过调控m6A甲基化修饰促进细胞自噬治疗糖尿病肾脏疾病（DKD）的情况，探讨YTK治疗DKD的可能作用机制。方法：选取16周龄SPF级db/db小鼠（DKD模型）45只为实验组，db/m小鼠9只为空白组，应用随机数字表法将实验组小鼠分为模型组、益糖康低、中、高剂量组(14.463、28.925、57.850 kg-1·d-1)、非奈利酮组2.6 mg·kg-1·d-1，给予YTK水提物和非那利酮灌胃8周，应用酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测血清和尿液中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白（NGAL）；应用全自动生化仪检测血尿素氮（UREA）、血肌酐（Cre-s）、血尿酸（UA）及尿白蛋白与肌酐的比值（UACR）来评价肾脏损害；分离小鼠的肾脏组织，苏木素-伊红染色法（HE）染色观察小鼠肾脏组织形态学变化；原位末端标记法（TUNEL）观察小鼠肾脏组织细胞凋亡情况；免疫组化法（IHC）检测小鼠肾脏组织中甲基转移酶样蛋白3（METTL3）、甲基转移酶样蛋白14（METTL14）、溶酶体相关膜蛋白2A型（LAMP2A）、微管相关蛋白轻链3Ⅱ（LC3Ⅱ）、Nod样受体蛋白3（NLRP3）的平均光密度值；实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）和Wes全自动蛋白表达分析系统检测各组小鼠肾脏组织中METTL3、METTL14、LAMP2A、LC3Ⅱ、螯合体1（P62）、YTHN6-甲基腺苷RNA结合蛋白3（YTHDF3）、热休克蛋白70（HSP70）、热休克蛋白90α（HSP90AA1）的蛋白表达水平。结果：药物干预8周后，与空白组相比，模型组小鼠血清NGAL、UREA、Cre-s、UA表达水平显著升高（P0.01）；尿液UACR、NGAL表达水平显著升高（P0.01）；小鼠肾脏组织细胞排列无序，结构残缺，细胞边缘不清晰可见明显炎症出血点及炎性细胞浸润发生；肾脏阳性细胞凋亡个数显著上升（P0.01）；METTL3、METTL14、NLRP3阳性表达增多，LAMP2A、LC3Ⅱ阳性表达下降（P0.01）；METTL3、METTL14、P62、HSP70 mRNA和蛋白表达增多，YTHDF3、LAMP2A、LC3Ⅱ、HSP90AA1 mRNA和蛋白表达减少（P0.01）；与模型组相比，各给药组小鼠血清NGAL、UREA、Cre-s、UA表达水平明显降低（P0.01）；尿液UACR、NGAL水平显著下降（P0.01）；小鼠肾脏组织可见细胞较规律排列，炎症出血点及炎症细胞呈不同程度减轻；肾脏阳性细胞凋亡个数显著下降（P0.01）；METTL3、METTL14、NLRP3阳性表达减少，LAMP2A、LC3Ⅱ阳性表达增多（P0.01）；METTL3、METTL14、P62、HSP70 mRNA和蛋白表达减少，YTHDF3、LAMP2A、LC3Ⅱ、HSP90AA1 mRNA和蛋白表达增多（P0.01）。结论：中药复方益糖康通过调控m6A修饰的作用促进细胞自噬治疗糖尿病肾脏疾病，发挥中药独特的优势。