D-半乳糖通过p53调节自噬和凋亡损伤小鼠耳蜗毛细胞

作     者：阎希芮 王艺蓉 楚敏 刘晴 施建蓉 董杨 YAN Xirui;WANG Yirong;CHU Min;LIU Qing;SHI Jianrong;DONG Yang

作者机构：上海中医药大学中西医结合学院上海201203 上海中医药大学中医学院上海201203 

出 版 物：《中华耳科学杂志》 (Chinese Journal of Otology)

年 卷 期：2025年第23卷第1期

页      面：101-107页

核心收录：

学科分类：1002[医学-临床医学] 100203[医学-老年医学] 10[医学] 

基　　金：国家自然科学基金(81774020) 上海中医药大学预算内项目(2021LK030) 上海市卫健委上海市进一步加快中医药事业发展三年行动计划项目[ZY(2021-2023)-0208] 

主　　题：老年性聋 D-半乳糖 自噬 凋亡 p53 

摘      要：目的在耳蜗基底膜离体培养模型上,观察D-半乳糖对小鼠耳蜗基底膜毛细胞的作用,并从自噬和凋亡途径进一步探讨其分子机制。方法选取SPF级3~4 d龄Wistar大鼠132只(264个耳蜗)体外培养3~4 d龄Wistar大鼠耳蜗基底膜,用100 mmol/L、300 mmol/L、500 mmol/L D-半乳糖处理24 h,将大鼠分为对照组、100 mmol/L D-半乳糖组、300 mmol/L D-半乳糖组和500 mmol/L D-半乳糖组,每组24只(48个耳蜗)。P53抑制剂Pifithrin-α(PFT-α)实验分为对照组、300 mmol/L D-半乳糖组、50μmol/L PFT-α组、300 mmol/L D-半乳糖+50μmol/L PFT-α组,每组9只(18个耳蜗)。采用Alexa Fluo 555-鬼笔环肽标记,进行全耳蜗毛细胞计数和定量分析。Western blot分析耳蜗基底膜自噬相关蛋白LC3-Ⅱ、p62、Beclin-1,细胞凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2、Cleaved Caspase-3以及p53蛋白的表达。免疫荧光定位检测耳蜗基底膜毛细胞上p53、LC3-Ⅱ、p62和Cleaved Caspase-3的蛋白表达变化。用p53抑制剂PFT-α抑制p53蛋白表达,检测下游蛋白LC3-Ⅱ、p62和Cleaved Caspase-3表达的变化。结果D-半乳糖可导致耳蜗基底膜毛细胞损伤和缺失,并随剂量增加而加重。Western blot结果显示,D-半乳糖可增加耳蜗基底膜p53、LC3-Ⅱ、p62和Cleaved Caspase-3的蛋白表达水平以及Bax/Bcl-2的比值,降低Beclin-1的表达,且呈一定剂量依赖性。免疫荧光结果显示,D-半乳糖可增强耳蜗基底膜毛细胞上p53、LC3-Ⅱ、p62和Cleaved Caspase-3蛋白表达。P53抑制剂PFT-α可以抑制D-半乳糖引起的p53、p62和Cleaved Caspase-3蛋白表达的增高,但可以进一步升高LC3-Ⅱ蛋白表达。结论D-半乳糖可通过p53调节自噬和凋亡诱导体外培养的耳蜗基底膜毛细胞损伤。