抗新型冠状病毒S蛋白scFv重组基因的构建

作     者：犹桃元 杨光勇 何光志 YOU Taoyuan;YANG Guangyong;HE Guangzhi

作者机构：贵州中医药大学基础医学院预防医学教研室贵州贵阳550025 

出 版 物：《沈阳医学院学报》 (Journal of Shenyang Medical College)

年 卷 期：2025年第27卷第1期

页      面：32-37页

学科分类：1001[医学-基础医学(可授医学、理学学位)] 100102[医学-免疫学] 10[医学] 

基　　金：贵州省科技计划项目(No.黔科合支撑4Y187号) 

主　　题：新型冠状病毒 刺突蛋白蛋白 单链抗体 

摘      要：目的:构建抗新型冠状病毒S蛋白单链抗体(scFv)重组基因。方法:采用基因工程抗体技术,对BALB/c小鼠利用新型冠状病毒S蛋白抗原进行免疫接种,通过提取脾脏总RNA取得抗体可变区(V)重链(VH)和轻链(VL)基因序列,经过多种引物PCR扩增并筛选得到对应的VH和VL基因序列,再经过提纯回收后,通过Linker将带有限制性酶切位点的抗新型冠状病毒S蛋白VH和VL引物基因与VH、VL基因用重叠延伸PCR方法成功连接得到scFv重组基因,测序结果通过NCBI网站使用BLAST在基因库对比分析。结果:成功获得抗新型冠状病毒S蛋白VH和VL基因,并通过重叠延伸PCR技术(SOE-PCR)方法连接得到scFv,scFv经过BLSAT分析显示其基因同源性大于80%。间接ELISA检测结果显示,原核表达上清有明显的结合。结论:本研究为新型冠状病毒的诊治及研发新型相关抗体提供技术基础。