发酵乳中活性益生菌三重数字PCR定量检测方法的建立

作     者：赵磊 刘洋 凌李维 柳鑫燕 赵渝 吴浩 ZHAO Lei;LIU Yang;LING Liwei;LIU Xinyan;ZHAO Yu;WU Hao

作者机构：上海市质量监督检验技术研究院国家市场监督管理总局重点实验室(乳及乳制品检测与监控技术)上海200233 上海师范大学生命科学学院上海200234 复旦大学人类表型组研究院复旦大学微生物组中心上海200438 

出 版 物：《中国乳品工业》 (China Dairy Industry)

年 卷 期：2025年第53卷第1期

页      面：73-80页

学科分类：0832[工学-食品科学与工程（可授工学、农学学位）] 08[工学] 083203[工学-农产品加工及贮藏工程] 

基　　金：国家市场监督管理总局技术保障专项项目(2023YJ16) 

主　　题：发酵乳 PMA 种特异性 芯片式数字PCR 

摘      要：益生菌发酵乳是益生菌市场发展的重要赛道,精确定量产品中活性益生菌对保障其营养功能至关重要。文章以嗜酸乳杆菌(Lactobacillus acidophilus)、鼠李糖乳杆菌(Lactobacillus rhamnosus)和动物双歧杆菌(Bifidobacterium animalis)为研究对象,采用种特异性引物和探针,结合叠氮溴化丙锭(propidium monoazide,PMA)染色,基于芯片式数字PCR技术建立了发酵乳中活性益生菌的三重定量检测方法。结果表明,3组引物和探针均能特异性扩增目标菌株,无交叉反应,且20μg/mL的PMA能够有效抑制嗜酸乳杆菌、鼠李糖乳杆菌和动物双歧杆菌死菌DNA的扩增。该检测方法对嗜酸乳杆菌、鼠李糖乳杆菌和动物双歧杆菌的灵敏度分别为1.65、2.20、2.16 copies/μL,重复性检测的相对标准偏差为1.52%~8.69%,成功实现了对发酵乳中3种常见益生菌的活菌定量检测。为益生菌发酵乳中活菌检测的标准化提供了技术支持和科学依据。