一种水稻叶片基因组DNA简易提取方法

作     者：金素奎 国倩倩 刘巧泉 高继平 JIN Su-kui;GUO Qian-qian;LIU Qiao-quan;GAO Ji-ping

作者机构：扬州大学教育部农业与农产品安全国际联合实验室扬州225009 扬州大学农学院扬州225009 

出 版 物：《生物技术通报》 (Biotechnology Bulletin)

年 卷 期：2025年第41卷第1期

页      面：74-84页

核心收录：

学科分类：0710[理学-生物学] 07[理学] 09[农学] 071007[理学-遗传学] 0901[农学-作物学] 090102[农学-作物遗传育种] 

基　　金：国家重点研发计划(2022YFD1200103) 江苏省重点研发计划(BE2022336) 

主　　题：水稻叶片 基因组DNA CTAB法 传统TPS法 简易TPS法 

摘      要：【目的】为了应对日益增加的大规模遗传材料鉴定需求,急需建立一种快速、简易、高效、低成本的基因组DNA提取方法。【方法】根据水稻遗传鉴定的特点,对传统TPS法进行改进和简化。(1)将特制的钢珠加样条与全自动研磨仪结合使用,提高了研磨水稻叶片组织的速度;(2)使用TPS缓冲液室温研磨裂解,无需液氮冷冻研磨;(3)研磨后的组织匀浆仅需75℃水浴20 min即可完成裂解;(4)室温静置5 min后吸取粗提液上清5μL至96孔PCR板内,使用排枪加入95μL灭菌的去离子水进行稀释,即完成基因组DNA的提取过程。【结果】简易TPS法提取基因组DNA的步骤减少至6步以内,省略了DNA沉淀、离心、洗涤、溶解等过程。提取过程简单、快速,可在30 min内完成96个样本的DNA提取。提取过程中使用的试剂种类较少且廉价易得、安全环保。通过优化DNA提取液的用量,用简易TPS法提取的基因组DNA开展的各类常规分子遗传鉴定的效果与CTAB法及传统TPS法相当。【结论】简易TPS法提高了水稻基因组DNA提取的效率,适合高通量的遗传鉴定。