重组人胸腺素β4滴眼液蛋白含量反相高效液相色谱检测方法的建立及验证

作     者：张波 王艺诺 孙进 ZHANG Bo;WANG Yinuo;SUN Jin

作者机构：沈阳药科大学辽宁沈阳110016 北京诺思兰德生物技术股份有限公司北京100085 

出 版 物：《中国生物制品学杂志》 (Chinese Journal of Biologicals)

年 卷 期：2025年第38卷第1期

页      面：96-101页

学科分类：1007[医学-药学(可授医学、理学学位)] 100704[医学-药物分析学] 10[医学] 

基　　金：政府间国际科技创新合作项目(2021YFE0115300) 

主　　题：反相高效液相色谱法 重组人胸腺素β4滴眼液 蛋白含量 

摘      要：目的建立重组人胸腺素β4(recombinant human thymosin beta 4,rh-Tβ4)滴眼液中蛋白含量检测的反相高效液相色谱(reversed-phase high-performance liquid chromatography,RP-HPLC)法,并进行验证,以期对rh-Tβ4滴眼液中蛋白含量进行质量控制。方法用ZORBAX 300SB-C18(4.6 mm×250 mm,5μm)色谱柱,以超纯水、乙腈、三氟乙酸为流动相进行梯度洗脱,紫外检测波长为210 nm,进样量为100μL,流速为1.0 mL/min,柱温为25℃,样品室温度为5℃,以标准曲线法计算滴眼液中蛋白含量;对方法进行系统适用性、专属性、线性与范围、准确性、重复性、中间精密度、溶液稳定性、耐用性验证。用建立的RP-HPLC法检测4批rh-Tβ4滴眼液蛋白含量。结果系统适用性主峰理论塔板数分别为192039、185819、186348,均不低于5000,主峰与相邻峰分离度分别为3.88、3.79、3.76,均大于1.5,系统适用性合格;空白溶剂、空白对照均未影响重组rh-Tβ4主峰积分,对检测结果无干扰,方法专属性良好;蛋白含量在50~150μg/mL范围内标准曲线线性良好,相关系数(R^(2))为0.9923,大于0.99;高、中、低浓度标准品回收率分别为98.01%、99.17%、97.70%;同浓度6份样品蛋白含量的RSD为1.38%;不同实验人员不同日期检测同一样品蛋白含量的RSD为1.05%;在0、6、12、18、24 h内,同一份供试品蛋白含量的RSD为0.36%;供试品在23、25和27℃柱温下蛋白含量的RSD为0.45%。4批rh-Tβ4滴眼液蛋白含量分别为0.51、0.51、0.49、0.50 mg/mL,均与标示量一致。结论建立了rh-Tβ4滴眼液蛋白含量检测的RP-HPLC法,经验证准确可靠,可对rh-Tβ4滴眼液中蛋白含量进行质量控制。