基于miR-190b/PHLPP1/AKT/FOXO3a通路探究补中益气汤对自身免疫性甲状腺炎模型小鼠海马神经元异常自噬的影响

作     者：刘晓炜 高天舒 

作者机构：辽宁中医药大学 天津中医药大学第一附属医院 辽宁中医药大学附属医院 

出 版 物：《中华中医药学刊》 (Chinese Archives of Traditional Chinese Medicine)

年 卷 期：2025年

学科分类：1008[医学-中药学(可授医学、理学学位)] 1006[医学-中西医结合] 100602[医学-中西医结合临床] 10[医学] 

基　　金：国家自然科学基金面上项目(82174359、81874441) 沈阳市临床医学研究中心项目(沈科发75号) 

主　　题：自身免疫性甲状腺炎 认知损伤 补中益气汤 自噬 miR-190b PHLPP1/AKT/FOXO3a 

摘      要：目的：基于miR-190b/Pleckstrin同源结构域和富亮氨酸重复蛋白磷酸酶（Pleckstrin homology domain leucine-rich repeat protein phosphatase，PHLPP1）/蛋白激酶B（Protein kinase B，AKT）/叉形头转录因O亚型3a（Forkhead BoxO3a，FOXO3a）通路探究补中益气汤对自身免疫性甲状腺炎（Autoimmune thyroiditis，AIT）模型小鼠海马神经元异常自噬的影响。方法：50只雌性NOD.H-2h4小鼠随机分为空白对照组（CG组）、模型组（MG组）、补中益气汤低、中、高剂量组（BG-1、BG-2、BG-3组），每组10只。通过猪甲状腺球蛋白诱导法建立AIT模型，造模成功后，BG-1、BG-2、BG-3组分别予2.73、8.19、24.57g/kg·d补中益气汤中药灌胃，CG组、MG组予等量蒸馏水灌胃，每灌胃6天休息1天，连续8周。Morris水迷宫实验检测小鼠空间学习记忆能力；酶联免疫吸附测定法（Enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA）检测小鼠血清三碘甲腺原氨酸(Triiodothyronine，T3)、四碘甲状腺原氨酸(Tetraiodothyronine，T4)、促甲状腺激素（Thyroid stimulating hormone，TSH）、甲状腺球蛋白抗体（Thyroglobulin antibody，TgAb）水平；苏木素伊红（Hematoxylin eosin，HE）染色法观察小鼠甲状腺组织形态变化；透射电子显微镜观察小鼠海马神经元超微结构；免疫荧光染色法观察小鼠脑组织海马CA1区LC3阳性表达；逆转录聚合酶链式反应（Reverse transcription polymerase chain reaction，RT-PCR）法检测小鼠海马组织miR-190b-5p、PHLPP1 mRNA表达；Wes全自动蛋白印迹定量分析系统检测小鼠海马组织Beclin1、LC3、P62、PHLPP1、AKT、p-AKT、FOXO3a、p-FOXO3a蛋白水平；双荧光素酶报告基因实验验证miR-190b-5p与PHLPP1靶向关系。结果：与CG组比较，MG组小鼠逃避潜伏期明显延长（P0.01），穿越平台次数和目标象限停留时间均显著降低（P0.01）；血清TgAb含量显著升高（P0.01）；甲状腺滤泡大小不等，滤泡内间质有大量淋巴细胞浸润；海马神经元结构受损，出现自噬小体；海马CA1区LC3平均荧光强度增加（P0.01）；海马组织Beclin1、LC3、PHLPP1、FOXO3a蛋白表达水平增高，P62、p-AKT/AKT、p-FOXO3a/FOXO3a蛋白表达水平降低（P0.01）；海马组织miR-190b-5p水平降低，PHLPP1 mRNA水平增高（P0.01）。与MG组相比，中药各组可使小鼠逃避潜伏期显著缩短（P0.05，P0.01），穿越平台次数和目标象限停留时间增加（P0.01）；血清TgAb水平显著降低（P0.01）；甲状腺滤泡上皮细胞结构较为完整，淋巴细胞浸润情况明显缓解；海马神经元细胞形态结构恢复，自噬小体减少；海马CA1区LC3平均荧光强度均降低（P0.01）；小鼠海马组织Beclin1、LC3、PHLPP1、FOXO3a蛋白表达水平降低，P62、p-AKT/AKT、p-FOXO3a/FOXO3a蛋白表达水平升高（P0.05，P0.01）；海马组织miR-190b-5p水平升高，PHLPP1 mRNA水平显著降低（P0.05，P0.01）。双荧光素酶实验证实PHLPP1是miR-190b-5p的靶向调控分子。结论：补中益气汤可能通过调控miR-190b/PHLPP1/AKT/FOXO3a信号通路改善AIT小鼠海马神经元异常自噬，从而减轻海马神经元损伤，缓解认知功能损伤。