抑肝扶脾方对肝郁脾虚型腹泻型肠易激综合征模型大鼠结肠组织AKT/mTOR通路的影响

作     者：酒苏婷 李慧颖 孙月婷 崔松香 徐心田 郑浩 陆为民 JIU Suting;LI Huiying;SUN Yueting;CUI Songxiang;XU Xintian;ZHENG Hao;LU Weimin

作者机构：南京中医药大学附属医院江苏省南京市210029 云南省曲靖市中医院 南京市浦口区中医院 

出 版 物：《中医杂志》 (Journal of Traditional Chinese Medicine)

年 卷 期：2025年第66卷第3期

页      面：290-299页

核心收录：

学科分类：1008[医学-中药学(可授医学、理学学位)] 1006[医学-中西医结合] 100602[医学-中西医结合临床] 10[医学] 

基　　金：国家自然科学基金(82305135) 国家中医药管理局全国名老中医药专家传承工作建设项目(国中医药人教发59号) 江苏省中医药管理局中医重点专科建设项目重点项目(ZD202309) 江苏省中医药管理局科技发展计划(苏中医科教18号) 南京中医药大学校“揭榜挂帅”重大项目(JBGS202405) 

主　　题：腹泻型肠易激综合征 肠黏膜屏障 炎症因子 蛋白激酶B 雷帕霉素靶蛋白 自噬 紧密连接蛋白 抑肝扶脾方 

摘      要：目的从蛋白激酶B(AKT)/雷帕霉素靶蛋白(mTOR)通路探究抑肝扶脾方治疗肝郁脾虚型腹泻型肠易激综合征(IBS-D)的可能作用机制。方法将60只SD大鼠随机分为对照组,模型组,抑肝扶脾方低、中、高剂量组,匹维溴铵组,每组10只。除对照组外其余各组通过夹尾刺激21天+番泻叶灌胃14天的方法建立肝郁脾虚型IBS-D大鼠模型。造模成功后抑肝扶脾方低、中、高剂量组给药量分别为0.96、1.93、3.87 g/(kg·d),匹维溴铵组给药量为13.5 mg/(kg·d),对照组及模型组予10 ml/(kg·d)蒸馏水,各组均每天灌胃1次,连续14天。实验期间记录各组大鼠一般情况,造模后及给药后比较大鼠体质量、Bristol粪便评分、腹壁撤退反射实验(AWR)评分;HE染色观察大鼠结肠组织病理形态;ELISA法检测大鼠血清中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素1β(IL-1β)、白细胞介素6(IL-6)水平;免疫荧光法检测大鼠结肠组织中AKT/mTOR通路相关蛋白[包括磷酸化蛋白激酶B(p-AKT)/AKT、磷酸化雷帕霉素靶蛋白(p-mTOR)/mTOR]相对表达量;Western Blot法检测大鼠结肠组织中自噬相关蛋白[包括UNC-51样激酶(ULK1)、Beclin1(自噬关键分子酵母Atg6同系物1)、微管相关蛋白1轻链3(LC3)]以及紧密连接蛋白[包括闭合蛋白(Occludin)、闭锁小带蛋白1(ZO-1)]水平。结果造模后,与对照组比较,其余各组大鼠体质量降低,粪便Bristol评分以及20、40、60、80 mmHg压力级别下AWR评分均升高(P0.05或P0.01)。给药后,与对照组比较,模型组大鼠体质量以及结肠组织中ULK1、Beclin1、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ、Occludin、ZO-1蛋白水平均降低(P0.05或P0.01);粪便Bristol评分,20、40、60、80 mmHg压力级别下AWR评分,血清中TNF-α、IL-1β、IL-6水平,以及结肠组织中p-AKT/AKT、p-mTOR/mTOR蛋白相对表达量均升高(P0.05或P0.01);病理形态结果显示,结肠组织固有层腺体上部杯状细胞明显减少,少量炎性细胞浸润;黏膜下层胶原纤维溶解,分界不清,着色变淡,微血管充血、扩张。与模型组比较,抑肝扶脾方各剂量组及匹维溴铵组大鼠体质量,以及结肠组织中Beclin1、Occludin、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ蛋白水平均升高(P0.05或P0.01);粪便Bristol评分,40、60、80 mmHg压力级别下AWR评分,血清中IL-1β、IL-6、TNF-α水平,以及结肠组织中p-AKT/AKT、p-mTOR/mTOR蛋白相对表达量均降低(P0.05或P0.01);抑肝扶脾方各剂量组及匹维溴铵组病理形态有不同程度的改善。与匹维溴铵组比较,抑肝扶脾方低、中剂量组在20、40、60 mmHg压力级别下AWR评分均升高,抑肝扶脾方低剂量血清中TNF-α、IL-1β、IL-6水平降低,抑肝扶脾方各剂量组结肠组织中p-mTOR/mTOR蛋白相对表达量均升高(P0.05)。与抑肝扶脾方低剂量组比较,抑肝扶脾方高剂量组及匹维溴铵组在各压力级别下AWR评分、结肠组织中p-AKT/AKT蛋白相对表达量降低,抑肝扶脾方中、高剂量组血清中TNF-α、IL-1β水平升高,结肠组织中p-mTOR/mTOR蛋白相对表达量降低(P0.05)。结论抑肝扶脾方可有效改善肝郁脾虚型IBS-D模型大鼠结肠组织病理损伤,降低粪便Bristol及AWR评分,其作用机制可能与降低炎症因子水平,抑制结肠组织中AKT/mTOR通路相关蛋白,从而提高自噬相关蛋白水平有关。