表达水痘-带状疱疹病毒gE蛋白的复制缺陷型重组腺病毒的构建

作     者：杨梦瑶 柴鹏弟 章青 宋敬东 裴银辉 段招军 YANG Mengyao;CHAI Pengdi;ZHANG Qing;SONG Jingdong;PEI Yinhui;DUANG Zhaojun

作者机构：华北理工大学基础医学院河北省慢性疾病基础医学重点实验室唐山063000 传染病溯源预警与智能决策全国重点实验室国家卫生健康委医学病毒和病毒病重点实验室中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所北京102206 

出 版 物：《病毒学报》 (Chinese Journal of Virology)

年 卷 期：2025年第41卷第1期

页      面：48-58页

核心收录：

学科分类：1007[医学-药学(可授医学、理学学位)] 100705[医学-微生物与生化药学] 1001[医学-基础医学(可授医学、理学学位)] 100103[医学-病原生物学] 10[医学] 

主　　题：水痘-带状疱疹病毒 带状疱疹疫苗 糖蛋白E 人26型腺病毒载体 

摘      要：体外构建表达水痘-带状疱疹病毒(Varicella-zoster virus,VZV)糖蛋白E(Glycoprotein E,gE)的复制缺陷型人26型重组腺病毒疫苗,并进行重组病毒免疫原性的初步评价。利用同源重组的方法将gE原始信号肽序列替换成tPA组织纤溶酶原激活剂(Tissue plasminogen activator,tPA)信号序列(tPA-gE),将目的片段基因(tPA-gE)连接到腺病毒载体Ad26-empty得到重组腺病毒质粒Ad26-tPA-gE。线性化的重组腺病毒质粒转染至HEK293A细胞进行病毒包装与扩增,利用氯化铯密度梯度离心法纯化病毒,基于腺病毒六邻体蛋白质测定病毒滴度,Western blot验证重组腺病毒中tPA-gE表达情况,电镜检测重组病毒大小与形态。重组病毒(Ad26-tPA-gE)通过肌肉注射免疫C57BL/6N小鼠,第8周后下颌采血通过间接ELISA检测小鼠血清中特异性的抗gE的抗体效价评价体液免疫,ELISPOT检测小鼠脾淋巴细胞分泌IFN-γ及IL-2情况观察细胞免疫。纯化得到滴度为7.2×10^(10)ifu/mL的重组腺病Ad26-tPA-gE,Western blot验证重组病毒感染的细胞能够正常表达gE,电镜检测病毒大小均一,形态完整。重组腺病毒疫苗Ad26-tPA-gE可成功诱导小鼠产生抗gE特异性IgG、IgG1和IgG2a抗体,以及淋巴细胞分泌IFN-γ和IL-2。成功构建了表达VZV gE的复制缺陷型重组腺病毒,免疫C57BL/6N小鼠后有效激活体液及细胞免疫反应,为后续基于腺病毒载体的带状疱疹疫苗研究提供基础。