抗病基因VpPR10转化‘砀山酥梨’及转化条件的优化

作     者：孟颢光 张朝红 王跃进 MENG Hao-guang;ZHANG Chao-hong;WANG Yue-jin

作者机构：西北农林科技大学园艺学院陕西杨凌712100 农业部西北园艺植物种质资源利用重点开放实验室陕西杨凌712100 陕西省农业分子生物学重点实验室陕西杨凌712100 河南农业大学植物保护学院郑州450002 

出 版 物：《园艺学报》 (Acta Horticulturae Sinica)

年 卷 期：2010年第37卷第10期

页      面：1567-1574页

核心收录：

学科分类：09[农学] 0902[农学-园艺学] 090201[农学-果树学] 

基　　金：国家‘863’计划项目(2007AA10Z182) 陕西省重大科技专项(2006kz05-G4) 

主　　题：梨 抗病基因 农杆菌介导 病程相关蛋白基因(VpPR10) 条件优化 

摘      要：将源自中国野生华东葡萄的抗病基因——病程相关蛋白基因导入‘砀山酥梨’,并对转化系统条件进行优化。首先将VpPR10基因重组于中间表达载体pWR-Ⅱ,得到重组质粒pWR-Ⅱ-VpPR10;继而以改进冻融法将其导入根癌农杆菌EHA105,再利用根癌农杆菌介导的叶盘转化法进行遗传转化。根癌农杆菌浓度OD600=0.5,离体叶片侵染5min,在含有100μmol·L-1乙酰丁香酮的培养基中暗处共培养48h有利于砀山酥梨的遗传转化;经PCR分析、Southern blot和RT-PCR检测,证明目的基因VpPR10已导入并整合到砀山酥梨基因组中;转化率为1.08%。