oar-miR-103和oar-miR-107通过靶向IL-1β基因区域调节其表达

作     者：高之煜 顾兰英 范文雨 曹鑫艳 陈创夫 肖非 易继海 盛金良 张彦兵 孙延鸣 GAO Zhi-yu;GU Lan-ying;FAN Wen-yu;CAO Xin-yan;CHEN Chuang-fu;XIAO Fei;YI Ji-hai;SHENG Jin-liang;ZHANG Yan-bing;SUN Yan-ming

作者机构：石河子大学动物科技学院新疆石河子832003 新疆泰昆集团股份有限公司新疆昌吉831203 

出 版 物：《动物医学进展》 (Progress In Veterinary Medicine)

年 卷 期：2025年第46卷第6期

页      面：31-35页

学科分类：090601[农学-基础兽医学] 09[农学] 0906[农学-兽医学] 

基　　金：国家自然科学基金项目(32360901,32060133) 兵团指导性科技计划项目(2023ZD042) 新疆维吾尔自治区青年科学基金项目(2022D01B197) 石河子大学高层次人才科研启动项目(RCZK202043) 

主　　题：白介素1β microRNAs miRanda 荧光素酶报告基因 

摘      要：为确定oar-miR-103和oar-miR-107靶向IL-1β基因的区域及结合能力,验证绵羊oar-miR-103和oar-miR-107对绵羊IL-1β表达的调控作用,用miRanda软件分析oar-miR-103、oar-miR-107靶向IL-1β基因的具体区域和结合能力;将IL-1β基因插入PGL3-promoter荧光素酶报告基因载体XbaⅠ酶切位点,分别将miR-NC、miR-103和miR-107模拟物与荧光素酶质粒共转染,通过双荧光素酶报告试验分析oar-miR-103和oar-miR-107与IL-1β基因区域靶向关系;分离原代绵羊肺泡巨噬细胞,miR-NC、miR-103和miR-107模拟物分别转染原代肺泡巨噬细胞,转染36 h后,通过实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测各组细胞中IL-1β表达水平。结果显示,oar-miR-103和oar-miR-107分别靶向IL-1β基因2个、3个区域;成功构建了荧光素酶报告载体pGL3-promoter-IL-1β;双荧光素酶试验显示,与miR-NC组相比,oar-miR-103和oar-miR-107两组均使pGL3-promoter-IL-1β活性显著下降(P0.01);与miR-NC组相比,oar-miR-107显著抑制了巨噬细胞IL-1βmRNA转录表达(P0.05)。说明oar-miR-103和oar-miR-107可通过靶向IL-1β基因区域调节其表达,为解析IL-1β表达机理积累了资料。