负载BMSC来源纳米囊泡的硒化透明质酸水凝胶的制备及其对胶质瘤GL261细胞的杀伤作用

作     者：张转转 周旋 陈翠敏 张停琳 高洁 ZHANG Zhuanzhuan;ZHOU Xuan;CHEN Cuimin;ZHANG Tinglin;GAO Jie

作者机构：上海大学转化医学研究院上海200444 海军军医大学第一附属医院临床研究中心上海200433 河南大学药学院河南郑州475004 海军军医大学第一附属医院上海市航海医学与药械转化重点实验室上海200433 

出 版 物：《中国肿瘤生物治疗杂志》 (Chinese Journal of Cancer Biotherapy)

年 卷 期：2025年第32卷第3期

页      面：247-256页

学科分类：1002[医学-临床医学] 100214[医学-肿瘤学] 10[医学] 

基　　金：国家自然科学基金(No.82072051) 

主　　题：胶质瘤 纳米囊泡 GL261细胞 声动力疗法 吲哚菁绿 复合水凝胶 

摘      要：目的:构建纳米囊泡杂化透明质酸水凝胶(ICG-NV@SeHA)并探讨其联合声动力疗法(SDT)杀伤小鼠胶质瘤GL261细胞的机制。方法:通过挤出法制备骨髓来源的间充质干细胞纳米囊泡(BMSC-NV),再将吲哚菁绿(ICG)掺入其中制备ICG-NV。在EDC存在下用ED对HA进行氨基化,合成AHA,进一步通过亲核加成反应与γ-硒代丁内酯(SBL)连接,合成SeHA。将AHA、ICG-NV和SBL溶液混合,发生氧化交联获得ICG-NV@SeHA,对其进行物理表征。用DiD标记ICG-NV和ICG-NV@SeHA后与GL261细胞共培养12 h,观察细胞内吞情况。用CCK-8法检测ICG-NV和ICG-NV@SeHA与GL261细胞和小鼠海马神经元HT22细胞的生物相容性。将GL261细胞分为PBS+超声处理(US)、ICG+US、IVG-NV+US和ICG-NV@SeHA+US组,Calcein-AM/PI染色法和DCFH-DA荧光探针标记法分别检测联合SDT对GL261细胞杀伤作用,以及对细胞内活性氧(ROS)生成的影响;采用细胞免疫荧光实验检测对细胞表面钙网蛋白(CRT)表达的影响,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测对细胞高迁移率族蛋白1(HMGB1)和三磷酸腺苷(ATP)释放的影响。结果:成功制备BMSC-NV,粒径约154.3 nm;ICG成功被包入囊泡中,包封率为40.6%;氨基成功连接在HA上,接枝率为32.5%。最后成功制备了ICG-NV@SeHA,透射电镜观察显示其具有疏松的多孔结构,流变结果储能模量(G′)损耗模量(G″),均符合水凝胶特性,且具有剪切变稀特性。细胞实验结果显示,ICGNV可以被GL261细胞有效摄取。CCK-8实验和Calcein-AM/PI荧光染色实验结果显示,ICG-NV和ICG-NV@SeHA均具有良好的生物相容性,对GL261和HT22细胞没有明显的细胞毒作用;而ICG-NV+US和ICG-NV@SeHA+US组细胞存活率较ICG+US组显著降低(P0.01或P0.001)。ICG-NV+US和ICG-NV@SeHA+US组细胞DCFH-DA探针绿色荧光强度显著高于PBS、PBS+US和ICG+US组(P0.0001或P0.001),反映细胞内产生大量的ROS,且细胞表面CRT表达显著增加(P0.0001),上清液中HMGB1和ATP的释放也增多(P0.05或P0.01)。结论:成功制备具备优异的机械性能和可注射性的ICG-NV@SeHA,生物相容性好,联合SDT能有效杀伤GL261细胞并诱导免疫原性细胞死亡(ICD),可能成为一种有效治疗胶质瘤术后复发的新手段。