含人AFP基因重组腺病毒载体的构建及其转染树突状细胞瘤苗的制备

作     者：杨静悦 曹大勇 刘文超 斯小明 YANG Jing-yue;CAO Da-yong;LIU Wen-chao;SI Xiao-ming

作者机构：第四军医大学西京医院肿瘤中心细胞生物学国家重点学科陕西西安710032 第四军医大学西京医院肝胆外科陕西西安710032 

出 版 物：《现代肿瘤医学》 (Journal of Modern Oncology)

年 卷 期：2009年第17卷第8期

页      面：1419-1422页

学科分类：1002[医学-临床医学] 100214[医学-肿瘤学] 10[医学] 

基　　金：国家自然科学基金(30672391) 全军医药卫生科研基金(06MA205) 陕西省自然科学研究项目基金(2004C222) 

主　　题：树突状细胞 腺病毒载体 AFP 转染 

摘      要：目的:构建含人AFP基因的腺病毒载体,体外转染树突状细胞,制备树突状细胞肝癌瘤苗。方法:将AFP基因亚克隆到pIND载体和Shuttle2载体中,构建穿梭载体Shuttle2-AFP。用PI-Sce Ⅰ和I-Ceu Ⅰ双酶切后将所获AFP基因片段再与线性化的腺病毒载体pAdeno-X连接,构成pAdeno-AFP重组腺病毒载体。其后,用重组腺病毒载体转染HEK293细胞,包装腺病毒表达载体。通过酶切、PCR对腺病毒载体进行鉴定。包装好的重组病毒载体pAdeno-AFP体外感染树突状细胞制备树突状细胞肝癌瘤苗后,FACS分析pAd-eno-AFP/DC表面分子的表达,酶联免疫吸附试验法(ELISA)检测AFP水平。结果:酶切、PCR鉴定证实,穿梭质粒插入片段为AFP基因。包装的腺病毒载体具有良好的感染性,可以在293细胞中形成病毒颗粒,腺病毒载体内携带AFP基因感染树突状细胞,pAdeno-AFP/DC能高水平的表达CD1a,CD11c,CD80,CD86以及HLA-DR,并分泌较高水平的AFP。结论:构建成功的含AFP腺病毒载体可以在树突状细胞中表达AFP,为DC瘤苗的进一步研究奠定了基础。