斯氏按蚊PPO1基因克隆及其与约氏疟原虫卵囊黑化关系的研究

作     者：杨松 黄复生 段建华 YANG Song;HUANG Fu-sheng;DUAN Jian-hua

作者机构：第三军医大学基础医学部病原生物学教研室重庆400038 

出 版 物：《中国寄生虫病防治杂志》 (Chinese Journal of Parasitic Disease Control)

年 卷 期：2005年第18卷第5期

页      面：321-324页

学科分类：1001[医学-基础医学(可授医学、理学学位)] 100103[医学-病原生物学] 10[医学] 

基　　金：国家自然科学基金资助项目(No.30300292) 

主　　题：按蚊 斯氏 疟原虫 约氏 前酚氧化酶 黑化 RT-PCR 原位核酸分子杂交 

摘      要：目的克隆和分析斯氏按蚊前酚氧化酶基因与约氏疟原虫卵囊黑化关系。方法根据其他昆虫前酚氧化酶基因的保守氨基酸序列设计简并引物,以斯氏按蚊全蚊RNA为模板,进行RT-PCR扩增,PCR产物纯化,克隆入pUCm-T载体,测定插入片段序列,对序列进行BLAST检索和鉴定。根据序列设计相应基因的特异引物,然后分别从血淋巴细胞或中肠扩增目的基因,并进行不同食源条件下前酚氧化酶基因的半定量、原位核酸分子杂交定位及与约氏疟原虫卵囊黑化关系的分析。结果获得了1种斯氏按蚊血淋巴前酚氧化酶基因cDNA部分序列,即AsPPO1(600bp),分别与冈比亚按蚊PPO1和大劣按蚊PPO2基因很相似,其编码的氨基酸序列均包含PO保守的铜结合位点CuA(HHWHWHLVYP)序列。在中肠和血淋巴内也获得相同的目的基因片段,半定量分析显示约氏疟原虫感染或诱导卵囊黑化呈现之前的表达明显增强,原位核酸分子杂交技术也进一步证实血淋巴有AsPPO1mRNA表达。结论As-PPO1很可能与疟原虫感染或约氏疟原虫卵囊黑化相关。