重组人EGF-IL-18融合蛋白的表达纯化及复性

作     者：潘建华 彭颖 郑昭暻 吕建新 Jian-Hua Pan;Ying Peng;Zhao-Jing Zheng;Jian-Xin Lu

作者机构：温州医学院细胞与分子医学研究所浙江省医学遗传学重点实验室温州325035 

出 版 物：《细胞生物学杂志》 (Chinese Journal of Cell Biology)

年 卷 期：2006年第28卷第5期

页      面：711-716页

核心收录：

学科分类：0710[理学-生物学] 07[理学] 08[工学] 09[农学] 071007[理学-遗传学] 0901[农学-作物学] 0836[工学-生物工程] 090102[农学-作物遗传育种] 

基　　金：浙江省自然科学基金(No.302769) 浙江省医药卫生重点科技项目(No.2001ZD007)资助 

主　　题：EGF-IL-18融合蛋白 包涵体 离子交换柱层析 柱上复性 

摘      要：融合基因EGF-IL-18与表达载体pET32a(+)连接构建融合型原核表达质粒pET32a(+)-EGF-IL-18。该基因在***(DE3)中获得高效表达,SDS-PAGE分析表明表达产物大部分以包涵体形式存在。以2mol/L尿素和1%TritonX-100对包涵体进行反复洗涤后,利用离子交换柱层析对包涵体进行柱上复性,结果表明离子交换层析柱上复性不仅能够获得可溶性的EGF-IL-18融合蛋白,而且产物同时得到纯化,纯度大于90%。复性的EGF-IL-18经分子筛进一步纯化后,体外实验证明具有促进人外周血单个核细胞(PBMC)IFN-g基因表达的能力。该方法简单、高效,为进一步开展EGF-IL-18的动物实验及其大量纯化制备打下基础。