刚地弓形虫Peroxiredoxin基因的克隆及其融合蛋白的高效表达和纯化

作     者：李雪艳 刘转转 付琳琳 颜超 杜文平 汤仁仙 郑葵阳 刘宜升 

作者机构：徐州医学院病原生物与免疫学教研室江苏徐州221002 

出 版 物：《中国病原生物学杂志》 (Journal of Pathogen Biology)

年 卷 期：2012年第7卷第4期

页      面：276-279,290页

学科分类：1001[医学-基础医学(可授医学、理学学位)] 100103[医学-病原生物学] 10[医学] 

基　　金：江苏省寄生虫病预防与控制高技术平台开放课题(No.WK009-003) 徐州医学院科研课题(No.2010KJ16) 

主　　题：刚地弓形虫 Prx基因 克隆 原核表达 蛋白纯化 

摘      要：目的克隆刚地弓形虫Prx基因,用IPTG诱导表达Prx融合蛋白并进行纯化。方法用PCR扩增目的基因片段并克隆至pGEX-6P-1载体,构建pGEX-6p-1/TgPrx原核表达载体;IPTG诱导表达Prx融合蛋白,表达产物进行SDS-PAGE和Western blot分析,GST亲和层析纯化融合蛋白。结果从弓形虫RH株DNA中扩增Prx基因,成功构建了弓形虫重组质粒pGEX-6p-1/TgPrx,并在大肠埃希菌(***)中得到高效表达,表达的融合蛋白分子质量为51ku,该蛋白可被鼠抗弓形虫血清特异性识别。结论原核表达具有生物学活性的弓形虫重组Prx蛋白(rTgPrx),该蛋白有望用于弓形虫病免疫学检测。