香榧ISSR-PCR扩增条件的优化和引物筛选

作     者：叶生月 陈钢 张慧 刘建杰 曾燕如 吴慧敏 YE Sheng-yue;CHEN Gang;ZHANG Hui;LIU Jian-jie;ZENG Yan-ru;WU Hui-min

作者机构：浙江林学院浙江省现代森林培育技术重点实验室浙江临安311300 浙江省临安市林业局浙江临安311300 

出 版 物：《浙江林学院学报》 (Journal of Zhejiang Forestry College)

年 卷 期：2010年第27卷第1期

页      面：87-92页

学科分类：0710[理学-生物学] 090701[农学-林木遗传育种] 0907[农学-林学] 07[理学] 09[农学] 071007[理学-遗传学] 0902[农学-园艺学] 090201[农学-果树学] 

基　　金："十一五"浙江省科技计划项目(2008C2200) 浙江省重中之重学科开放基金资助项目(200505 200508 200602) 

主　　题：经济林学 香榧 ISSR—PCR 引物筛选 

摘      要：以香榧Torreya grandis‘Merrillii’基因组DNA为材料,对影响简单序列重复区间扩增-聚合酶链式反应(ISSR-PCR)的Taq酶用量、Mg2+浓度、模板DNA用量、磷酸碱基脱氧核苷酸(dNTPs)浓度和引物浓度等进行了优化试验。优化后的香榧ISSR-PCR扩增体系为:总容积20μL,包括30 ng模板DNA,16.67 nkat Taq酶,0.350μmol.L-1引物,1.625 mmol.L-1 Mg2+,0.250 mmol.L-1 dNTPs,10×PCR buffer 2μL。PCR扩增程序:94℃变性5.0 min;35个循环:94℃变性30 s,退火45 s,退火温度视引物而定,72℃延伸1.5 min;最后72℃延伸7.0 min,4℃保温。在此基础上,从77个ISSR引物中筛选出34个适合香榧ISSR分析的引物,且通过梯度PCR确定了各自最适的退火温度。研究结果为香榧遗传图谱构建打下了基础。