DOTAP脂质体介导VEGF基因转染人脂肪干细胞及目的基因的表达

作     者：陈犹白 张启旭 Butler C E 吴叶文 张丽萍 董江陵 陈聪慧 韩岩 

作者机构：美国德克萨斯大学MD安德森肿瘤中心整形外科休斯敦77030 解放军总医院整形修复科北京100853 美国贝勒医学院医学系肾脏学部 北京美莱美容整形医院口腔美容中心 

出 版 物：《临床耳鼻咽喉头颈外科杂志》 (Journal of Clinical Otorhinolaryngology Head And Neck Surgery)

年 卷 期：2016年第30卷第12期

页      面：966-971页

学科分类：1001[医学-基础医学(可授医学、理学学位)] 10[医学] 

基　　金：国家自然科学基金面上项目(No:81272123 No:81571864) 

主　　题：吸脂术 脂肪干细胞 血管内皮生长因子 转染 脂质体 

摘      要：目的：研究脂质体介导的血管内皮生长因子（VEGF）基因转染人脂肪干细胞（hASCs）及VEGF的表达。方法：胶原酶消化吸脂术脂肪,收获细胞沉淀,培养至第4代时利用流式细胞术检测细胞表型,并诱导其成脂成骨分化,鉴定为hASCs。转染组利用DOTAP脂质体将pIRES2-EGFP-VEGF质粒转入hASCs,对照组为脂质体空载。免疫荧光染色检测hASCs内VEGF的表达,ELISA检测上清液中VEGF浓度的变化。结果：1ml吸脂术脂肪可得到（4.38±0.21）×10^5个细胞,第4代时hASCs高表达CD90（81.49%）,低表达CD19（6.37%）、CD31（14.91%）、CD34（17.56%）和CD45（15.39%）,诱导分化后油红O和茜素红染色均呈阳性。分光光度计显示质粒DNA浓度为595ng/μl。转染组hASCs表达GFP和VEGF,转染效率为（43.69±18.53）%;对照组不表达GFP,但表达较低的VEGF。转染组VEGF的光密度是对照组的2.13倍,其上清液中的VEGF浓度随时间显著上升,与对照组相比差异有统计学意义（P〈0.05）。结论：DOTAP脂质体可成功将pIRES2-EGFP-VEGF质粒转入hASCs,转染后的VEGF表达和分泌水平显著提高。