2型猪链球菌SsU05-0474的表达纯化及单克隆抗体制备

作     者：杨宝玲 陈福广 谢芳 刘思国 沈国顺 张跃灵 YANG Bao-ling;CHEN Fu-guang;XIE Fang;LIU Si-guo;SHEN Guo-shun;ZHANG Yue-ling

作者机构：沈阳农业大学畜牧兽医学院沈阳110866 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室哈尔滨150001 

出 版 物：《中国动物传染病学报》 (Chinese Journal of Animal Infectious Diseases)

年 卷 期：2016年第24卷第2期

页      面：25-30页

学科分类：090601[农学-基础兽医学] 09[农学] 0906[农学-兽医学] 

主　　题：2型猪链球菌 Ss Mps基因 蛋白表达 蛋白纯化 单克隆抗体 

摘      要：为了鉴定2型猪链球菌(Streptococcus suis serotype 2,Ss2)菌毛骨架蛋白Ss U05-0474(本文中简称SsMps)在菌体中的位置和存在形式,本研究以2型猪链球菌05ZYH33菌株基因组作为模板,PCR扩增菌毛骨架蛋白基因Ss U05-0474,将其克隆至表达载体pET22b,构建重组质粒pET22b/SsMps,转化至*** BL21(DE3)中,用IPTG诱导表达SsMps蛋白,并通过亲和层析纯化。纯化的SsMps蛋白免疫BALB/c雌鼠,利用细胞融合筛选制备该重组蛋白的单克隆抗体。结果显示,SsMps蛋白在大肠杆菌中以可溶形式表达,分子质量大小为45 k Da。每升大肠杆菌培养物可获得SsMps重组蛋白约30 mg,纯度大于95%。获得了1株该重组蛋白的单克隆抗体1D9,抗体亚型为IgG1/κ。通过单抗1D9与05ZYH33菌体蛋白组分Western blot,发现该抗体能够特异识别SsMps,并定位出SsMps大部分存在于细胞壁蛋白成分中,呈不同聚体存在。本研究制备的SsMps纯化蛋白及其单克隆抗体为研究SsMps蛋白的功能提供了工具。