整合数字基因表达谱与全基因组关联分析鉴定猪血液性状候选基因

作     者：徐盼 张震 章峰 杨斌 段艳宇 XU Pan;ZHANG Zhen;ZHANG Feng;YANG Bin;DUAN Yan-yu

作者机构：江西农业大学省部共建猪遗传改良与养殖技术国家重点实验室 

出 版 物：《中国农业科学》 (Scientia Agricultura Sinica)

年 卷 期：2016年第49卷第2期

页      面：348-360页

核心收录：

学科分类：0905[农学-畜牧学] 09[农学] 

基　　金：国家基金(青年项目)(31301950) 江西省自然科学基金(2010GQN0045) 

主　　题：猪 血液性状 数字基因表达谱 表达数量性状位点 全基因组关联分析 候选基因 

摘      要：【目的】整合数字基因表达谱与全基因组关联分析鉴定白色杜洛克×二花脸F资源群体的血液性状候选基因。【方法】白色杜洛克×二花脸F资源群体在(240±3)d屠宰,收集血液于抗凝管中进行血常规检测。利用Illumina 60K SNP芯片对1 020头F资源群体进行基因分型。剔除基因型检出率5%的个体。检出率95%、次等位基因频率5%、哈代-温伯格检验(HWE)P5×10、与性染色体连锁疑似常染色体的SNP被筛除。利用Illumina GA II测序仪测序对502头F资源群体的肝脏进行数字基因表达谱测序。测序得到的原始数据经过滤获得清洁标签后与参考标签数据库比对,将能唯一比对到参考基因序列的清洁标签数量进行标准化处理以获得标准化的基因表达量。每个转录本的表达水平进一步转化为lg2值。在少于20%的个体中表达的转录本被滤去。表型性状和基因表达性状使用R程序包中Gen ABEL内polygentic功能进行性别、批次和亲缘关系的校正。其残差使用R程序包中斯皮尔曼系数评估基因表达水平与表型数据的关联性,设定保守阈值P5×10时调整多重检验。将检测到的表达数量性状位点(eQTL)及其对应基因根据其位置相对照的关系进行绘图。搜寻前期GWAS最高点5.0 Mb区域内eQTL结合GWAS结果进行综合分析。Gene Ontology&KEGG pathway富集分析使用在线工具DAVID。基因共表达网络使用在线工具Gene MANIA进行构建。【结果】白色杜洛克×二花脸F资源群体中502个个体的20 108个肝脏转录本通过了质检。当P5×10时鉴别到与血红蛋白(HGB)、红细胞数目(RBC)、红细胞压积(HCT)、平均红细胞体积(MCV)、平均红细胞血红蛋白含量(MCH)和白细胞数目(WBC)关联的转录本共259个。有34个转录本与一个以上表型关联。用上述血细胞性状关联的转录本进行eQTL定位,当阈值P10时得到304个eQTL,每个转录本映射到1—6个eQTL,其中有35个顺式eQTL,120个反式eQTL。MCH和MCV的顺式eQTL位置重叠位于8号染色体。7号染色体存有数量最多的eQTL,其中多数为反式eQTL。通过eQTL定位确定了KIT为候选基因。Gene Ontology&KEGG pathway富集分析鉴别到与红细胞性状相关的基因KIT、PSEN2和TFRC,与白细胞性状相关的基因THBS1和CYR61。通过整合前期GWAS数据及eQTL定位并建立基因共表达网络,鉴定到与白细胞性状相关的基因RPS10。【结论】利用基于白色杜洛克×二花脸F资源群体的eQTL定位并结合前期GWAS数据,鉴别到与红细胞性状相关的基因KIT、PSEN2和TFRC,与白细胞性状相关的基因THBS1、CYR61和RPS10。