hOSM在COS-7细胞中表达及对人A375黑色素瘤细胞的生长抑制作用

作     者：叶建新 盛伟华 马丽丽 谢宇峰 缪竞诚 杨吉成 YE Jian-xin;SHENG Wei-hua;MA Li-li;XIE Yu-feng;MIAO Jing-cheng;YANG Ji-cheng

作者机构：苏州大学医学院细胞与分子生物学教研室 

出 版 物：《临床肿瘤学杂志》 (Chinese Clinical Oncology)

年 卷 期：2006年第11卷第2期

页      面：128-132页

学科分类：1002[医学-临床医学] 100214[医学-肿瘤学] 10[医学] 

主　　题：hOSM基因 COS-7细胞表达 抑瘤作用 

摘      要：目的:克隆人抑瘤素(hOSM)基因并构建真核表达载体,在COS-7细胞中表达具有抑制人A375黑色素瘤细胞生长的基因重组蛋白。方法:用PMA刺激U937细胞,抽提总RNA,经RT-PCR获得cDNA,与pUCmT载体连接,经PCR获得全长hOSM基因,再与pcDNA3·1/myc-his(-)A真核表达载体连接,构建真核表达重组质粒pcDNA3·1A-hOSM,经PCR和限制性酶切及DNA测序鉴定后,在COS-7细胞中进行瞬时表达,采用RT-PCR鉴定hOSM基因的转录,MTT法检测表达产物抑制A375细胞生长的活性。结果:重组入载体中的基因片段不仅方向正确,而且所克隆的hOSM基因,与GeneBank报告序列完全一致,并成功地在COS-7细胞中瞬时表达了具有抑制A375细胞生长的rhOSM蛋白。结论:本研究成功地克隆出hOSM基因并在COS-7细胞中获得瞬时表达,证明了表达的基因重组蛋白具有抑制人A375黑色素瘤细胞生长的活性,为在真核细胞中进行稳定表达,深入研究rhOSM的生物学功能创造了条件。