华支睾吸虫脂肪酸结合蛋白基因的克隆、表达及免疫原性分析

作     者：张波 张蓓蓓 李波 华慧 李向阳 刘转转 颜超 付琳琳 汤仁仙 郑葵阳 ZHANG Bo;ZHANG Beibei;LI Bo;HUA Hui;LI Xiangyang;LIU Zhuanzhuan;YANG Chao;FU Linlin;TANG Renxian;ZHENG Kuiyang

作者机构：徐州医学院病原生物学与免疫学教研室感染与免疫实验室江苏徐州221004 

出 版 物：《徐州医学院学报》 (Acta Academiae Medicinae Xuzhou)

年 卷 期：2015年第35卷第6期

页      面：351-354页

学科分类：1001[医学-基础医学(可授医学、理学学位)] 100103[医学-病原生物学] 10[医学] 

基　　金：国家自然科学基金(81171590,31302077) 家畜疫病病原生物学国家重点实验室开放基金( SKLVEB2013KFKT005) 江苏高校优势学科建设工程资助项目(2013) 

主　　题：华支睾吸虫 脂肪酸结合蛋白 原核表达 免疫原性 

摘      要：目的：克隆表达华支睾吸虫脂肪酸结合蛋白（ Clonorchis sinensisfatty acid binding protein，CsFABP），并对其免疫原性进行分析。方法根据编码CsFABP的已知基因序列设计合成一对引物，应用RT－PCR技术扩增编码CsFABP的基因片段。将扩增的CsFABP的基因片段克隆到原核质粒pET30a（＋）中，转化入大肠埃希菌（ E． coli） DH5α中，经含卡那霉素琼脂平板筛选，小量抽提质粒，经双酶切、PCR及测序鉴定阳性克隆。将阳性重组质粒转化入*** BL21中，经异丙基－β－D－硫代半乳糖苷（ IPTG）诱导表达，表达产物经十二烷基硫酸钠－聚丙烯酰胺凝胶电泳（ SDS－PAGE）、考马斯亮蓝染色、Western blot分析鉴定。结果经酶切、菌液PCR以及测序确认，成功构建重组质粒pET30a（＋）－CsFABP，并在*** BL21中高效表达。 Western blot试验证实表达的Cs-FABP能被特异的兔抗华支睾吸虫免疫血清识别。结论本研究成功构建重组质粒pET30a（＋）－CsFABP，获得的CsFABP表达蛋白质具有一定的反应原性。