重组乙型肝炎病毒变异s基因的表达及其抗原性的分析

作     者：葛军辉 张乐之 姚玉成 刘会敏 王新民 余宏宇 何金 胡以平 

作者机构：第二军医大学长征医院病理科上海200003 第二军医大学长海医院实验诊断科上海200433 第二军医大学基础部细胞生物学教研室上海200433 

出 版 物：《细胞与分子免疫学杂志》 (Chinese Journal of Cellular and Molecular Immunology)

年 卷 期：2002年第18卷第6期

页      面：565-567,574页

核心收录：

学科分类：1007[医学-药学(可授医学、理学学位)] 100705[医学-微生物与生化药学] 1001[医学-基础医学(可授医学、理学学位)] 100103[医学-病原生物学] 10[医学] 

基　　金：国家自然科学基金资助No .3 9970 676 3 96670 669 

主　　题：重组 s基因 乙型肝炎表面抗原 变异 真核表达 免疫细胞化学 

摘      要：目的 构建乙型肝炎病毒 (HBV)变异s基因真核表达载体 ,研究变异所致乙肝表面抗原 (HBsAg)免疫学性状的改变。方法 利用DraⅢ和XhoⅠ双酶切含有突变位点的HBVDNA 1.2拷贝的质粒P3.8Ⅱ ,获得 90 4bp带有突变点的HBV S基因片段。将其置换含有HBVDNA(adr亚型 )S和S2片段的真核表达载体 pCMV S2 .S的相应片段 ,从而构建s基因nt5 87G→A突变的真核表达载体 pCMV S2 .S +14 5R ;并转染人肝癌细胞系HepG2 ,以获得分泌变异型HBsAg的细胞系。利用EIA及细胞免疫染色法 ,探讨变异抗原与抗 HBs结合力的变化。结果 构建了HBsAg的第 14 5位甘氨酸→精氨酸突变体的真核表达载体。将其转染哺乳动物细胞后第 3天 ,培养上清中用EIA检测HBsAg呈阳性 ,A值随时间延长而上升 ,但变异型的A值明显低于野生型。变异型与野生型HBsAg细胞免疫化学检测均有部分细胞呈阳性 ,但差别不显著。结论 HBsAg第 14 5位甘氨酸→精氨酸的突变体的真核表达载体表达产物具有良好的抗原性 ,能够与抗 HBs结合 。