角蛋白在血管生成中的作用实验研究

作     者：徐永 张素珍 钟振华 解慧琪 苏自奋 魏于全 XU Yong;ZHANG Suzhen;ZHONG Zhenhua;XIE Huiqi;SU Zifen;WEI Yuquan

作者机构：四川大学生命科学学院成都610041 四川大学华西医院生物治疗国家重点实验室.肿瘤生物治疗研究室 四川大学华西医院生物治疗国家重点实验室.干细胞与组织工程研究室 

出 版 物：《中国修复重建外科杂志》 (Chinese Journal of Reparative and Reconstructive Surgery)

年 卷 期：2008年第22卷第10期

页      面：1246-1250页

核心收录：

学科分类：0831[工学-生物医学工程（可授工学、理学、医学学位）] 08[工学] 0836[工学-生物工程] 

基　　金：国家高技术研究发展计划(863)资助项目(2004CB518800) 

主　　题：角蛋白17 血管生成 人脐静脉内皮细胞 迁移 增殖 

摘      要：目的研究角蛋白17(keratin17,K-17)对血管内皮细胞迁移、增殖和管样结构形成的影响,了解K-17在血管生成过程中的作用。方法将人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cell,HUVEC)于含10%FBS的DMEM培养液培养过夜,采用脂质体转染法向HUVEC中分别加入K-17-小分子干扰RNA(small interfer-ingRNA,siRNA)-转染试剂(Lipofectamine2000)混合液(实验组)、siRNA-转染试剂混合液(阴性对照组),使siRNA终浓度为50nmol/L;对照组加相同体积仅含载体(脂质体Lipofectamine2000)的培养基,采用RT-PCR和Westernblot法检测K-17-siRNA沉默效果。于培养后36h采用细胞计数法检测细胞增殖能力;培养后30h,分别采用24孔板Millicell小室检测细胞迁移能力以及胶原纤维凝胶实验法检测细胞分化成管能力。另取未经siRNA处理的HUVEC分别在含10%FBS的培养基(A组)、含2%FBS的培养基(B组)和含2%FBS及10ng/mLbFGF的培养基(C组)中培养24h,检测HUVECK-17的表达。结果实验组K-17-siRNA作用于HUVEC30h后,RT-PCR检测示细胞内K-17mRNA的表达为0.09±0.01,较阴性对照组0.35±0.07和对照组0.34±0.06均降低了约74%(P0.05)。K-17-siRNA作用HUVEC36h后,实验组细胞增殖能力与阴性对照组和对照组比较差异均无统计学意义(P0.05)。HUVEC转染K-17-siRNA30h后,实验组HUVEC24h穿过Millicell小室上室膜进入下室的细胞数为(3719.0±319.0)个,明显低于阴性对照组(7356.3±795.7)个和对照组(7437.5±212.0)个,差异有统计学意义(P0.05)。实验组、阴性对照组和对照组HUVEC24h分化形成的管数分别为(1.1±0.5)、(3.6±0.5)和(3.2±0.6)管/视野,实验组与阴性对照组、对照组间比较差异均有统计学意义(P0.05)。A、B、C组HUVECK-17的表达分别为0.25±0.02、0.08±0.01和0.72±0.03,3组间比较差异均有统计学意义(P0.01)。结论K-17对HUVEC增殖无影响,但增强其迁移能力,有利于血管生成。