受磷蛋白重组腺病毒的制备与鉴定

作     者：刘梦娜 汪凯 任安经 章卫平 吕建新 

作者机构：温州医科大学检验学院、生命科学学院325035 第二军医大学基础部病理生理学教研室上海200433 

出 版 物：《医学研究杂志》 (Journal of Medical Research)

年 卷 期：2016年第45卷第10期

页      面：48-53页

学科分类：1001[医学-基础医学(可授医学、理学学位)] 10[医学] 

基　　金：国家自然科学基金资助项目(面上项目)(31271221) 

主　　题：受磷蛋白 腺病毒 心肌 肌质网 

摘      要：目的构建含受磷蛋白PLB基因的重组腺病毒载体,为研究受磷蛋白PLB的生物学功能提供工具。方法将RT-PCR获得的受磷蛋白PLB cDNA克隆至pShuttle-CMV载体,PmeⅠ酶切线性化后,电转化至含有腺病毒骨架质粒的大肠杆菌BJ5183中进行同源重组,从而获得重组腺病毒载体,PacⅠ酶线性化该重组载体,转染293细胞进行病毒的包装和扩增,经超离心对重组病毒Ad-PLB进行纯化;测定病毒效价后,体外感染大鼠心肌细胞H9C2,Western blot法验证腺病毒病毒介导的重组PLB蛋白表达。结果成功构建了重组腺病毒载体,体外包装制备了PLB的重组腺病毒,扩增纯化后的病毒效价达6.25×10^(10)/ml,能有效介导PLB在心肌细胞中的重组表达。结论过表达受磷蛋白PLB的重组腺病毒载体构建成功,为之后受磷蛋白PLB的相关生物学功能研究奠定了基础。