补阳还五汤通过调节MAPK信号通路抗内皮细胞损伤的作用

作     者：刘志勇1 游宇2 刘玉晖1易文凤1 曾兰芳1 

作者机构：江西中医药大学药学院药理系 南昌 330004 南昌大学第一附属医院消化内科 南昌 330006 

出 版 物：《中国临床药理学杂志》 (The Chinese Journal of Clinical Pharmacology)

年 卷 期：2016年第32卷第22期

页      面：2098-2103页

核心收录：

学科分类：1008[医学-中药学(可授医学、理学学位)] 1006[医学-中西医结合] 100602[医学-中西医结合临床] 10[医学] 

基　　金：国家自然科学基金资助项目 

主　　题：关键词:补阳还五汤 同型半胱氨酸 丝裂原活化蛋白激酶 细胞通透性 人脐静脉内皮细胞 

摘      要：目的 研究补阳还五汤抗同型半胱氨酸(Hcy)诱 导 的 脐 静(HUVEC)损伤的作用及机制。方法以补阳还五汤连续灌胃SD大鼠1周，提取补阳还五汤含药血清。将HUVEC置 于5% CO2、37 °C细胞恒温培养养，当细 胞 汇 合 度 达 到80%，选取对数期细胞，开始分组与模型。将HUVEC随机分为10组:空 白 组(10%空 白 血 清)、模 型 组(10%空 白 血+Hcy)、小中大3个百分含量实验组(5%，10%，20%补阳还五汤)、模型组－I(10%胎 牛 血 清+ Hcy)、抑制剂－I组(10μmol·L－1MAPK抑制剂SB20358Hcy)、抑制剂－II组(10μmol·L－ 1EＲK抑制剂PD98059 + Hcy)、抑制剂－III组(10μmol·L－ 1Ｒho激酶 抑 制 剂Y27632 + Hcy)、抑 制 剂－IV组(10μmol·L－ MLCK抑制 剂ML － 7 + Hcy)，且Hcy造模 浓 度 为3 mmol·L－ 1。用噻 唑(MTT)测定Hcy对HUVEC的毒性作用;用蛋白质印迹法测定丝激酶(p38MAPK)、细胞外调节蛋白激酶(EＲK1 /2)蛋白的表达量;用MillicEＲS电阻仪测定各组单层细胞跨膜电阻值(TEEＲ)的变化。结果与空白光密度值(代表细胞增值)为0. 95 ± 0. 05比较，7个Hcy梯度组的光密是0. 91 ± 0. 06，0. 88 ± 0. 08，0. 68 ± 0. 06，0. 60 ± 0. 07，0. 58 ± 0. 04，0. 51 + ，0. 40 + 0. 02，差异有统计学意义(P 0. 05)。P38MAPK蛋白的相对表达:空白组、模型组、小中大3个百分含量实验组、模型对照组(即模型－I组)及4个抑制剂组分别是0. 42 ± 0. 06，1. 10 ± 0. 12，0. 33 ± 0. 03，0. 68 ± 0. 08，0. 46 ±，0. 42 ± 0. 03，0. 37 ± 0. 04，0. 48 ± 0. 05，0. 32 ± 0. 02，0. 63 ± 0. 0。磷 酸P38MAPK蛋白相对表达量以上各组分别是0. 12 ± 0. 01，0. 42 ± ，0. 40 ± 0. 05，0. 18 ± 0. 02，0. 20 ± 0. 01，0. 22 ± 0. 02，0. 18 ± 0. 02，0. 30 ±，0. 17 ± 0. 01，0. 19 ± 0. 02。与空白组比较，模型组的P38MAPK、磷酸化P38MAP表达量显著增加，差异有明显统计学意义(P 0. 01)。与模型组比较，中高2个百分含量实验组和抑制剂组，磷酸化P38MAPK蛋白相对表达量表，差异有明显统计学意义(P 0. 01);与模 型 组 比 较，小百分含量实P38MAPK显著下降，差异有统计学意义(P 0. 01)。磷酸化EＲK1 /2蛋白相达量:空白组、模型组、小 中 大3个百分含量实验组、模 型 对 照 组(即 模 型－I组)及2个抑制剂组分别是0. 69 ± 0. 03，0. 95 ± 0. 05，0. 41 ± 0. 02，0. 50 ±，0. 51 ± 0. 04，0. 91 ± 0. 03，0. 80 ± 0. 02，0. 69 ± 0. 03。与 空 白 组 比，模 型 Pho － EＲK1 /2蛋白表达量显著增加，差异有明显统计学意义(P 0. 01)。与模型组比较，小中高3个百分含量实验组的Pho － EＲK1 /2蛋白表达显著，差异有明显统计学意义(P 0. 01);与模型组比较，抑制剂－I、抑制剂－II组的Pho － EＲK1 /2蛋白显著下降，差异有统计学意义(P 0. 05)。EＲK1 /2蛋白相表达量各组 依 次 是0. 55，0. 60，0. 59，0. 58，0. 58，0. 59，0. 60，0. 60，与 模 型较，各组差异无统计学意义(P 0. 05)。HUVEC细胞单层跨膜电阻(TEEＲ):空白组、模型组、小中大3个百分含量实验组、模 型 对 照 组(即 模 型－I组)及Vol. 32No. 22November2016(Serial No. 228)4个抑制剂组 依 次 是(60. 48 ± 1. 61)，(13. 44 ± 0. 95) ，(40. 32 ± 0. 92) ，(41. 44 ± 0. 89) ，(36. 96 ± 1. 59) ，(13. 44 )(24. 64 ± 1. 32) ，(30. 24 ± 1. 67) ，(24. 64 ± 0. 72) ，(23. 52 ± 0. 74)Ω·cm－ 2。与空白组比较，模型组的内皮细胞TEEＲ值显低，差异有明显统计学意义(P 0. 01)。与模