针对小鼠Chmp1b基因的可诱导shRNA表达转基因载体的构建及功能鉴定

作     者：蔡莹 刘柳 连博文 陈澄 CAI Ying;LIU Liu;LIAN Bowen;CHEN Cheng

作者机构：中国医科大学基础医学院发育细胞生物学教研室教育部医学细胞生物学重点实验室沈阳110122 

出 版 物：《中国医科大学学报》 (Journal of China Medical University)

年 卷 期：2016年第45卷第11期

页      面：968-972,976页

学科分类：1007[医学-药学(可授医学、理学学位)] 100705[医学-微生物与生化药学] 1001[医学-基础医学(可授医学、理学学位)] 100103[医学-病原生物学] 10[医学] 

基　　金：国家自然科学基金(31271231 30600211) 

主　　题：shRNA Chmp1b Cre/LoxP 转基因载体 构建 

摘      要：目的设计构建针对小鼠Chmp1b基因的可诱导shRNA表达转基因载体,以用于制备相关转基因小鼠,并在体外验证其有效性。方法剔除pc DNA3.1载体的CMV启动子以及多克隆位点,然后接入带有LacZ-fLoxP插入失活的小鼠U6启动子并引入适当的酶切位点,装入设计好的shRNA片段,测试shRNA抑制Chmp1b表达的效率与专一性,检查Cre重组酶介导位点特异性重组去除LoxP位点之间的lac基因后U6启动子活性恢复情况。结果设计的shRNA片段可明显降低Chmp1b的表达,抑制效率达90%以上;成功构建针对小鼠Chmp1b基因的可诱导shRNA表达转基因载体,插入U6启动子中的LacZ-fLoxP片段既可以控制U6启动子活性又可以起到报告基因的作用。结论针对小鼠Chmp1b基因的可诱导shRNA表达转基因载体可以用于制备相关转基因小鼠。