新型菜豆环氧化物水解酶的异源表达及对映归一性催化特性

作     者：叶慧华 胡蝶 李闯 程建青 邓超 邬敏辰 YE Hui-hua;HU Die;LI Chuang;CHENG Jian-qing;DENG Chao;WU Min-chen

作者机构：江南大学药学院无锡214122 生物工程学院无锡214122 无锡医学院无锡214122 

出 版 物：《中国生物工程杂志》 (China Biotechnology)

年 卷 期：2016年第36卷第10期

页      面：21-27页

核心收录：

学科分类：0710[理学-生物学] 07[理学] 08[工学] 09[农学] 071007[理学-遗传学] 0901[农学-作物学] 0836[工学-生物工程] 090102[农学-作物遗传育种] 

基　　金：江苏省研究生科研创新计划资助项目(KYLX15-1151 KYLX15-1190) 

主　　题：菜豆 环氧化物水解酶 表达 对映归一性 

摘      要：为挖掘新型环氧化物水解酶(EH),探讨其对映归一性催化特性,以菜豆(Phaseolus vulgaris)总RNA为模板,采用RT-PCR扩增了一种菜豆EH(Pv EH1)的编码基因pveh1,并将其在大肠杆菌BL21(DE3)中进行了表达。一级和三维结构分析表明,Pv EH1与绿豆和苜蓿EHs的同源性分别为85.7和81.1%,其催化三联体为Asp^(101)-His^(299)-Asp^(264),属于α/β水解酶超家族。当Pv EH1催化外消旋环氧苯乙烷水解的转化率达99.1%时,产物(R)-苯乙二醇的对映体纯度为33.6%e.e.p。Pv EH1对(S)-和(R)-SO的区域选择性系数α_S和β_R分别为91.1和53.3%。Pv EH1的挖掘及其对映归一性催化特性的分析不仅增加了此类植物EHs的数目,而且为其归一性催化机制的研究和区域选择性的改造奠定了基础。