Tyr163和Tyr223硝基化修饰参与同型半胱氨酸诱导的胱硫醚β-合酶失活

作     者：王环愿 徐嘉惠 周艺 孙琪 董玉 王雯 

作者机构：首都医科大学基础医学院生理学与病理生理学系北京100069 代谢紊乱相关心血管疾病北京市重点实验室 

出 版 物：《中南医学科学杂志》 (Medical Science Journal of Central South China)

年 卷 期：2017年第45卷第1期

页      面：27-31页

学科分类：1001[医学-基础医学(可授医学、理学学位)] 100104[医学-病理学与病理生理学] 10[医学] 

基　　金：国家自然科学基金(编号81370450) 

主　　题：胱硫醚β-合酶 硝基化修饰 同型半胱氨酸 

摘      要：目的探讨酪氨酸(tyrosine,Tyr,Y)残基(Tyr163,Tyr223)硝基化修饰与同型半胱氨酸(homocysteine,Hcy)诱导的胱硫醚β-合酶(cystathionineβ-synthase,CBS)活性降低之间的关系。方法运用体外基因突变的方法,将CBS可能发生硝基化修饰的酪氨酸残基替换为苯丙氨酸(phenylalanine,F)或丙氨酸(alanine,A),构建野生型(WT)和突变型(Y163F,Y223A)质粒,转染HEK293H工具细胞,诱导重组基因表达;利用Hcy刺激后,提取细胞蛋白,分析硝基化CBS的含量及其酶活性。结果 WT,Y163A和Y223F质粒均能正常表达CBS并且具有活性;Hcy(500μmol/L,24h)诱导WT CBS发生硝基化修饰,但是Y163A和Y223F突变使CBS的硝基化程度明显下降(P0.05,P0.01);WT+Hcy组CBS活性明显低于WT组(P0.01);Y163A+Hcy组和Y223F+Hcy组CBS活性高于WT+Hcy(P0.01,P0.05)。结论 Hcy可以导致CBS活性降低,与Hcy诱导CBS酪氨酸残基(Tyr163,Tyr223)发生硝基化修饰有关。