猪IL-1β与IL-18 SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR检测方法的建立

作     者：汪伟 倪艳秀 温立斌 吕立新 周俊明 俞正玉 茅爱华 张雪寒 李彬 郭容利 王小敏 范红结 何孔旺 WANG Wei;NI Yan-xiu;WEN Li-bin;L(U) Li-xin;ZHOU Jun-ming;YU Zheng-yu;MAO Ai-hua;ZHANG Xue-han;LI Bin;GUO Rong-li;WANG Xiao-min;FAN Hong-jie;HE Kong-wang

作者机构：江苏省农业科学院兽医研究所农业部兽用生物制品工程技术重点实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京210014 南京农业大学动物医学院江苏南京210095 

出 版 物：《江苏农业学报》 (Jiangsu Journal of Agricultural Sciences)

年 卷 期：2011年第27卷第6期

页      面：1289-1294页

学科分类：090603[农学-临床兽医学] 09[农学] 0906[农学-兽医学] 

基　　金：江苏省自然科学基金面上项目(BK2009327) 江苏省自然科学基金重点项目(BK2010068) 国家自然科学基金项目(31072155) 江苏省农业科技自主创新探索性研究项目[CX(11)4040] 国家“973”项目(2006CB504403) 

主　　题：猪 促炎症细胞因子 IL-1β IL-18 荧光定量PCR 

摘      要：IL-1β和IL-18是重要的促炎症细胞因子,在介导机体炎症反应中起重要作用。为了建立在体外定量检测猪细胞因子IL-1β和IL-18 mRNA表达水平的SYBR GreenⅠ荧光定量PCR方法,依据GenBank中登录的猪细胞因子基因IL-1β、IL-18及管家基因β-actin核苷酸序列,设计特异性引物,经RT-PCR从3D4猪肺泡巨噬细胞系中克隆和扩增了上述3个因子核苷酸片段,构建含有各自引物扩增序列的重组质粒作为阳性模板,建立了检测IL-1β、IL-18及β-actin SYBR GREEⅠ荧光定量PCR方法。该方法起始模板数与Ct值之间线性关系好,相关系数达到0.990以上;特异性强,扩增产物形成单一的特异性熔解峰;敏感性高,初始模板的检出下限达到了1μl 1.0×102拷贝;重复性好,组内变异系数均小于4%。