雌激素缺乏型人骨髓间充质干细胞肾虚表型的验证

作     者：魏秋实 何伟 陈镇秋 陈达 洪郭驹 陈建发 杨鹏 Wei Qiu-shi He Wei Chen Zhen-qiu Chen Da Hong Guo-ju Chen Jian-fa Yang Peng

作者机构：广州中医药大学第一附属医院骨科广东省广州市510407 广州中医药大学国家重点学科中医骨伤科学实验室广东省广州市510405 

出 版 物：《中国组织工程研究》 (Chinese Journal of Tissue Engineering Research)

年 卷 期：2017年第21卷第5期

页      面：669-675页

学科分类：0710[理学-生物学] 07[理学] 071007[理学-遗传学] 

基　　金：国家自然科学基金青年科学基金项目(81302994)<补肾药通过TAZ与经典Wnt通路crosstalk调控肾虚型骨髓基质干细胞成骨能力的机制> 国家自然科学基金面上项目(81473697)<不同证型股骨头坏死与MRI 病理及分子分型相互关系的探讨研究> 国家自然科学基金面上项目(81573996) 

主　　题：骨髓 间质干细胞 雌激素拮抗剂 组织工程 干细胞 骨髓干细胞 雌激素 骨髓间充质干细胞 芳香化酶 肾虚 表型 骨代谢疾病 国家自然科学基金 

摘      要：背景:因雌激素缺乏导致绝经后骨质疏松症患者骨髓间充质干细胞增殖和成骨分化能力下降,从雌激素及其受体角度研究该病的发病机制和治疗策略具有重要意义。目的:观察雌激素缺乏型骨髓间充质干细胞的肾虚表型特点。方法:第3代骨髓间充质干细胞在成骨诱导条件下培养,用不同浓度(0,10-10,10^(-9),10^(-8),10^(-7)mol/L)芳香化酶抑制剂来曲唑干预细胞,未诱导的骨髓间充质干细胞作空白对照组。q PCR和Western Blot检测AROM mR NA和蛋白表达,MTT检测细胞增殖能力,碱性磷酸酶活性检测细胞成骨能力,ELISA检测细胞上清液中雌二醇水平,qP CR检测肾虚标志物cAMP mRNA表达。结果与结论:(1)10^(-8) mol/L来曲唑对骨髓间充质干细胞内AROM mR NA和蛋白的抑制效果最好;(2)培养72 h,10^(-8) mol/L来曲唑组细胞增殖能力最低;(3)培养第14天,10^(-8)mol/L来曲唑组细胞碱性磷酸酶活性低于其他组;(4)10^(-8) mol/L来曲唑组细胞上清液中雌二醇水平低于其他组;(5)10^(-8) mol/L组细胞cAMP mRNA表达低于其他组;(6)结果表明,10^(-8) mol/L来曲唑在成骨诱导环境中能明显抑制骨髓间充质干细胞增殖及向成骨分化,同时降低骨髓间充质干细胞内cAMP表达及合成和分泌雌二醇的能力,说明适宜浓度来曲唑作为AROM抑制剂建立的雌激素缺乏型骨髓间充质干细胞模型具有肾虚表型特征。