人源极光激酶A在毕赤酵母和MCF-7细胞中的表达及纯化

作     者：于洋 于丽娜 谢萍 王福启 麻薇 施维 YU Yang YU Lina XIE Ping WANG Fuqi MA Wei SHI Wei

作者机构：广州体育学院运动与健康系运动生理学教研室广东广州510500 吉林大学生命科学学院分子酶学工程教育部重点实验室吉林长春130012 广州医科大学附属口腔医院牙周病科广州口腔病研究所口腔医学重点实验室广东广州510140 吉林出入境检验检疫局技术中心吉林长春130062 吉林大学中日联谊医院心血管内科吉林长春130033 

出 版 物：《吉林大学学报（医学版）》 (Journal of Jilin University：Medicine Edition)

年 卷 期：2017年第43卷第2期

页      面：266-270页

学科分类：0710[理学-生物学] 07[理学] 08[工学] 09[农学] 071007[理学-遗传学] 0901[农学-作物学] 0836[工学-生物工程] 090102[农学-作物遗传育种] 

基　　金：吉林省科技厅科研基金资助课题(20130206010YY) 

主　　题：人源激光激酶A 毕赤酵母X33 MCF-7细胞 细胞增殖 

摘      要：目的:构建人源极光激酶A(AURKA)真核表达载体,检测其在毕赤酵母X33和MCF-7细胞中的表达及纯化。方法:将双酶切PCR扩增的目的基因与真核表达载体连接,构建重组质粒。电转法转染重组质粒,筛选后采用SDS-PAGE和Western blotting法检测AURKA蛋白的表达,Ni-NTA柱法纯化表达的蛋白;放射自显影法检测AURKA的生物活性;细胞计数法检测转染重组质粒后MCF-7细胞增殖情况。结果:2种重组质粒经PCR均扩增出1 212bp目的基因,表明真核表达载体构建成功。重组AURKA蛋白相对分子质量约为50 000,且可磷酸化其底物组蛋白H3,表明重组AURKA具有活性。与转染空质粒和野生型MCF-7细胞比较,转染AURKA 24和48h后MCF-7活细胞数量明显增加。结论:AURKA在毕赤酵母和MCF-7细胞中成功表达和纯化,且其过表达可促进细胞增殖。