绵羊黏膜趋化因子CCL28基因的克隆、序列分析与原核表达

作     者：乔新安 李宏基 王月影 朱彦彩 韩立强 杨国宇 王艳玲 QIAO Xin-an;LI Hong-ji;WANG Yue-ying;ZHU Yan-cai;HAN Li-qiang;YANG Guo-yu;WANG Yan-ling

作者机构：河南农业大学动物生理生化实验室郑州450002 河南科技学院细胞工程重点实验室新乡453003 

出 版 物：《畜牧兽医学报》 (ACTA VETERINARIA ET ZOOTECHNICA SINICA)

年 卷 期：2008年第39卷第6期

页      面：842-847页

核心收录：

学科分类：0710[理学-生物学] 090602[农学-预防兽医学] 07[理学] 08[工学] 09[农学] 0906[农学-兽医学] 071007[理学-遗传学] 0901[农学-作物学] 0836[工学-生物工程] 090102[农学-作物遗传育种] 

基　　金：河南省重点科技攻关项目(0523010500) 

主　　题：绵羊 黏膜相关上皮趋化因子 分子克隆 序列分析 原核表达 

摘      要：利用同源序列克隆原理设计1对克隆引物,从绵羊结肠黏膜组织提取mRNA,通过RT-PCR获得CCL28基因,将PCR产物克隆、测序,并进行序列分析;再根据克隆的序列设计1对表达引物,用PCR法从重组克隆载体中扩增出含BamHⅠ/XhoⅠ酶切位点的CCL28片段,双酶切后亚克隆至pGEX-4T-1载体,构建重组原核表达载体pGEX-CCL28,转化宿主菌***21(DE3),经IPTG诱导进行表达,SDS-PAGE鉴定。克隆的绵羊CCL28基因包含完整的开放阅读框,克隆片段长444 bp,ORF为387 bp,编码129个氨基酸,与人、小鼠、猪、牛该基因的同源性分别为76.4%、61.4%、84.3%和92.9%,推测的氨基酸序列与人、小鼠、猪、牛的同源性分别为76%、63%、84%和93%,表达的融合蛋白分子量约为39 ku,并以包涵体形式存在。为下一步研究绵羊CCL28的生物学功能奠定基础。