先天性长QT综合征KCNQ1基因真核表达载体的构建及表达

作     者：李伟 杨钧国 任法鑫 杜戎 袁国会 桂乐 王擎 

作者机构：华中科技大学同济医学院附属协和医院心血管病研究所武汉430022 克利夫兰大学心血管遗传中心 

出 版 物：《华中科技大学学报（医学版）》 (Acta Medicinae Universitatis Scientiae et Technologiae Huazhong)

年 卷 期：2004年第33卷第5期

页      面：531-534页

核心收录：

学科分类：1004[医学-公共卫生与预防医学(可授医学、理学学位)] 1002[医学-临床医学] 100201[医学-内科学(含：心血管病、血液病、呼吸系病、消化系病、内分泌与代谢病、肾病、风湿病、传染病)] 100401[医学-流行病与卫生统计学] 10[医学] 

基　　金：国家自然科学基金资助项目 (No. 30 170 377) 卫生部科研基金资助项目 (No . 981130 ) 

主　　题：KCNQ1基因 真核表达载体 IRES EGFP 先天性长QT综合征 HEK293细胞 原核表达载体 限制性酶切 cDNA克隆 功能研究 

摘      要：目的 在原核表达载体pSP6 4 KCNQ1的基础上 ,构建KCNQ1的真核表达载体。方法 先将pSP6 4 KC NQ1通过限制性酶切得到KCNQ1cDNA ,将后者克隆入 pEGFP N1中 ,构建中间过渡载体 pEGFP KCNQ1;将pEGFP KCNQ1和 pIRES EGFP分别用NheⅠ和EcoRⅠ双酶切 ,把KCNQ1cDNA克隆到 pIRES EGFP ,即构建了pIRES EGFP KCNQ1。然后利用Effectene转染试剂介导将pIRES EGFP KCNQ1转染HEK2 93细胞。 结果 在原核表达载体 pSP6 4 KCNQ1的基础上 ,获得了KCNQ1的真核表达载体 pIRES EGFP KCNQ1,并使其在HEK 2 93细胞中成功表达。结论 该法可成功构建、表达KCNQ1的真核表达载体 ,为进一步的功能研究奠定了基础。