TRPC1/ORAI1复合体调节HUVECs SOC和ROC介导的Ca^(2+)内流和NO生成

作     者：王腊梅 胡清华 钟华 唐娜 孙志萍 何芳 WANG La-mei HU Qing-hua ZHONG Hua TANG Na SUN Zhi-ping HE Fang

作者机构：新疆地方病与民族高发病教育部重点实验室新疆石河子832002 石河子大学医学院医学机能实验中心新疆石河子832002 华中科技大学同济医学院病理生理学系卫生部呼吸系疾病重点实验室湖北武汉430030 石河子大学医学院病理生理教研室新疆石河子832002 

出 版 物：《基础医学与临床》 (Basic and Clinical Medicine)

年 卷 期：2017年第37卷第5期

页      面：696-704页

学科分类：1001[医学-基础医学(可授医学、理学学位)] 100101[医学-人体解剖与组织胚胎学] 10[医学] 

基　　金：国家自然科学基金(31160239 81160018) 

主　　题：TRPC1 ORAI1 一氧化氮 钙离子 人脐静脉内皮细胞 

摘      要：目的研究瞬时受体电位通道1(TRPC1)/钙释放激活钙通道调节分子1(ORAI1)复合体在人脐静脉内皮细胞(HUVECs)钙池操纵性钙通道(SOC)和受体操纵性钙通道(ROC)介导Ca^(2+)内流和NO生成中的作用。方法取2~3代HUVECs,将构建的TRPC1和ORAI1干扰质粒分别转染入HUVECs。用激光共聚焦显微镜观察细胞转染效果,real-time PCR和Western blot检测TRPC1、ORAI1 mRNA和蛋白的表达及抑制效率。细胞随机分组:特异性质粒转染组即实验组,未转染组即空白对照组及空质粒组(vehicle组),将上述3组细胞分别与CaR激动剂、ROC模拟剂TPA+CaR负性变构调节剂Calhex231、蛋白激酶C(PKC)抑制剂Ro31-8220、经典型PKCs和PKCμ抑制剂Go6967孵育,用荧光探针Fura-2/AM及DAF-FM负载方法同步检测[Ca^(2+)]i和NO。随后将构建的TRPC1和ORAI1干扰质粒同时转染入HUVEC,与CaR激动剂孵育后检测[Ca^(2+)]i和NO,用免疫共沉淀法检测TRPC1和ORAI1的相互作用。结果 1)与对照组相比,TRPC1及ORAI1组,mRNA和蛋白表达均明显降低(P0.05);2)在4种不同处理作用下,TRPC1及ORAI1转染组中细胞内Ca^(2+)浓度变化值和NO净荧光强度值均明显降低(P0.05);3)与对照组及单转染TRPC1及ORAI1组比,共转染组细胞内Ca^(2+)浓度变化值和NO净荧光强度值均明显降低(P0.05);4)TRPC1与ORAI1相互作用形成复合体,且在CaR激动剂的剌激下相互作用增强。结论 TRPC1与ORAI1复合体共同调节CaR经SOC和ROC激活介导的Ca^(2+)内流和NO生成。