沙眼衣原体pORF5质粒蛋白抑制肿瘤坏死因子α诱导HeLa细胞凋亡

作     者：杨晓玉 邹燕 龚思露 卜继常 周洲 刘良专 李忠玉 Yang Xiaoyu;Zou Yan;Gong Silu;Bu Jichang;Zhou Zhou;Liu Liangzhuan;Li Zhongyu

作者机构：南华大学医学院病原生物学研究所医学微生物学教研室特殊病原体防控湖南省重点实验室湖南衡阳421001 

出 版 物：《中华皮肤科杂志》 (Chinese Journal of Dermatology)

年 卷 期：2017年第50卷第5期

页      面：341-345页

核心收录：

学科分类：1007[医学-药学(可授医学、理学学位)] 100705[医学-微生物与生化药学] 1001[医学-基础医学(可授医学、理学学位)] 100103[医学-病原生物学] 10[医学] 

基　　金：国家自然科学基金(31470277、81102230、31300156) 

主　　题：沙眼衣原体 细胞凋亡 肿瘤坏死因子α 半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3 bcl-2相关x蛋白质 B细胞淋巴瘤/白血病-2蛋白 pORF5质粒蛋白 

摘      要：目的 探讨沙眼衣原体质粒蛋白pORF5对肿瘤坏死因子α（TNF？α）诱导HeLa细胞凋亡的影响。方法 将含pORF5基因的慢病毒重组表达载体与辅助质粒共转染293T细胞制备慢病毒，慢病毒收集浓缩后再感染HeLa细胞，流式细胞仪分选获得pORF5基因稳定转染细胞株（pORF5？HeLa），同时建立空载体转染对照细胞株（对照HeLa）。将两种细胞株分别分为两组，一组用20 μg/L TNF？α处理（处理组），一组仅用新鲜培养基培养（未处理组），作用6 h，Hoechst33258染色观察凋亡细胞形态，流式细胞仪检测细胞凋亡率，实时 PCR检测凋亡相关蛋白Caspase3、Bcl？2和Bax mRNA表达水平，Western印迹检测Bax、Bcl？2蛋白表达水平。结果 TNF？α处理细胞6 h后，Hoechst33258染色发现pORF5？HeLa和对照HeLa细胞中均可见不同程度的核固缩、碎裂，高亮蓝色凋亡小体；pORF5？HeLa细胞的凋亡率为（35.5 ± 4.5）%，对照HeLa细胞凋亡率为（63.6 ± 5.8）%，均显著高于相应未处理组［（9.5 ± 1.5）%和（7.9 ± 0.9）%，t值分别为13.53、32.36，均P 〈 0.01］。处理组pORF5？HeLa细胞中Bax和Caspase3 mRNA表达水平较处理组对照HeLa细胞分别降低72.8%和84.5%（t值分别为35.29，42.25，均P 〈 0.01），但Bcl？2 mRNA的表达水平显著高于处理组对照HeLa细胞（t = 87.12，P 〈 0.01）。处理组pORF5？HeLa细胞中Bax蛋白表达水平亦显著低于处理组对照HeLa细胞（t = 17.58，P 〈 0.01），而Bcl？2蛋白表达水平较对照HeLa细胞增加6.8倍，差异有统计学意义（t = 18.93，P 〈 0.01）。结论 pORF5可能通过增强抗凋亡蛋白Bcl？2降低促凋亡蛋白Caspase3和Bax的表达，抑制TNF？α诱导的HeLa细胞凋亡。