心肌Cav1.2钙通道NT片段的提取纯化及其与CaM的相互作用

作     者：苏敬阳 邵冬雪 雷明 康泽 赵君 方涵田 郭凤 赵美眯 郝丽英 封瑞 SU Jingyang;SHAO Dongxue;LEI Ming;KANG Ze;ZHAO Jun;FANG Hantian;GUO Feng;ZHAO Meimi;HAO Liying;FENG Rui

作者机构：中国医科大学药学院药物毒理学教研室沈阳110122 

出 版 物：《中国医科大学学报》 (Journal of China Medical University)

年 卷 期：2017年第46卷第5期

页      面：397-400页

学科分类：1007[医学-药学(可授医学、理学学位)] 1006[医学-中西医结合] 100706[医学-药理学] 100602[医学-中西医结合临床] 10[医学] 

基　　金：国家自然科学基金(31400981 31471091) 大学生创新计划项目(2015069 201510159068 201510159047 201610159000064) 

主　　题：NT 提取 纯化 CaM GS Tpull-down实验 

摘      要：目的探讨心肌Cav1.2钙通道NT蛋白片段提取与纯化的方法,并研究其与CaM的相互作用。方法将NT的cDNA插入pGEX-6p-3质粒载体后,转化大肠杆菌BL-21感受态细胞,大量培养并利用异丙基硫代-β-D半乳糖苷(IPTG)诱导NT的GST融合蛋白表达,GS-4B beads分离纯化,Pre Scission蛋白酶切除GST标签,进行十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰氨凝胶电泳(SDSPAGE)检测蛋白纯度和相对分子质量。采用GST pull-down实验研究NT片段与Ca M的相互作用。结果 SDS-PAGE结果显示成功纯化获得NT蛋白片段,且具有较高的纯度。GST pull-down实验结果显示NT可与Ca M结合,且具有浓度依赖性。结论本研究成功制备与纯化了心肌Cav1.2钙通道NT蛋白片段,为深入研究蛋白相互作用及NT的生物学功能奠定了基础。