人白细胞介素23受体基因的克隆和原核表达

作     者：车昌燕 张国华 赵燕 张蕾 张云 王树惠 刘力 CHE Chang-yan;ZHANG Guo-hua;ZHAO Yan;ZHANG Lei;ZHANG Yun;WANG Shu-hui;LIU Li

作者机构：北京协和医学院基础学院中国医学科学院基础医学研究所北京100005 山西医科大学汾阳学院山西汾阳032200 

出 版 物：《现代肿瘤医学》 (Journal of Modern Oncology)

年 卷 期：2008年第16卷第6期

页      面：877-880页

学科分类：1002[医学-临床医学] 100214[医学-肿瘤学] 10[医学] 

基　　金：国家自然科学基金资助项目(编号:30671944) 

主　　题：白细胞介素23受体(IL-23R) 克隆和表达 融合蛋白 

摘      要：目的:从外周血单个核细胞(PBMC)中克隆人白细胞介素23受体(hIL-23R)编码区序列,构建原核表达载体并在大肠杆菌中进行表达。方法:分离人外周血单个核细胞(PBMC),提取PBMC的总RNA,应用RT-PCR技术,以PBMC的cDNA为模版,扩增出hIL-23R的编码区(1890bp),将其克隆至pMD 19-T载体,经酶切和测序鉴定后,亚克隆于pGEX-4T-1中构建原核表达载体pGEX-4T-1-hIL-23R,转化大肠杆菌感受态细胞BL-21(DE3),异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导后收集菌体蛋白,经Western-blot对融合蛋白进行鉴定。结果:获得了hIL-23R编码区序列,构建原核表达载体并在大肠杆菌中表达,表达的融合蛋白主要以包涵体形式存在,其相对分子质量Mr为97KDa。结论:成功构建hIL-23R原核表达载体并在大肠杆菌中表达hIL-23R融合蛋白。