GM-CSF与BZLF1融合基因修饰的重组BCG的构建与表达

作     者：薛庆节 杨媛媛 胡文洁 吕厚东 李士根 陈廷 XUE Qing-jie;YANG Yuan-yuan;HU Wen-jie;LV Hou-dong;LI Shi-gen;CHEN Ting

作者机构：济宁医学院病原生物学教研室医学免疫学山东省重点学科山东济宁272067 

出 版 物：《中国热带医学》 (China Tropical Medicine)

年 卷 期：2014年第14卷第9期

页      面：1035-1038,1049页

学科分类：1003[医学-口腔医学] 10[医学] 

基　　金：山东省高等学校科技计划项目(No.J12LK56) 山东省自然基金(No.ZR2012HM037) 教育部留学回国人员科研启动基金(No.20101174) 山东省高等学校青年骨干教师国内访问学者项目(2012年度) 

主　　题：融合基因GCBF 基因重组 重组卡介苗 

摘      要：目的将人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子基因(GM-CSF)与EB病毒即刻早期基因(BZLF1)重组为融合基因GCBF,并转化入卡介苗(BCG)中进行表达。方法用随机引物Oligo(d T)15进行RT-PCR,分别获得人GM-CSF和BZLF1编码序列的c DNA。将纯化GM-CSF和BZLF1 PCR扩增产物插入分泌表达载体p MV261,并转化入感受态细胞Escherichia coli DH5α(*** DH5α),在LB培养基上进行卡那霉素抗性选择,测序正确的序列进行剪接式重叠延伸,将目的基因GM-CSF和BZLF1编码经多肽接头(Gly4Ser)3序列连接,构建融合基因GCBF,将GCBF克隆至p MV261,转化感受态细胞*** DH5α,在LB培养基平板上进行卡那霉素抗性选择,阳性克隆提取质粒后转化感受态BCG,western-blot检测GCBF在r BCG中的表达。结果目的基因GM-CSF和BZLF1 RT-PCR产物大小分别为461 bp和788bp,与预期值一致。构建的重组质粒经双酶切、扩增及测序鉴定证实,融合基因GCBF(1209bp)正确插入载体,成功转化入BCG感受态细胞,且被正确表达。结论融合基因GCBF修饰的r BCG构建及表达成功,为进一步探讨r BCG杀伤EB病毒阳性肿瘤的免疫活性研究奠定了实验基础。